| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第12-28页 |
| 1.1 偏头痛 | 第12-13页 |
| 1.1.1 偏头痛的概述 | 第12页 |
| 1.1.2 偏头痛的研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2 CGRP | 第13-16页 |
| 1.2.1 CGRP的介绍 | 第13-14页 |
| 1.2.2 CGRP与偏头痛 | 第14-16页 |
| 1.3 抗CGRP抗体 | 第16-23页 |
| 1.3.1 抗CGRP抗体在偏头痛治疗中的作用 | 第16-19页 |
| 1.3.2 抗CGRP抗体的种类及研究现状 | 第19-20页 |
| 1.3.3 Fremanezumab及其Fab片段 | 第20-23页 |
| 1.4 抗体Fab片段的聚乙二醇修饰 | 第23-26页 |
| 1.4.1 聚乙二醇修饰的概述 | 第23-24页 |
| 1.4.2 聚乙二醇修饰的类型 | 第24-25页 |
| 1.4.3 抗体Fab片段的聚乙二醇修饰 | 第25-26页 |
| 1.5 选题依据和研究意义 | 第26-28页 |
| 第二章 ACFab在大肠杆菌W3117 中的表达与纯化研究 | 第28-80页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第28-34页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 实验试剂及配方 | 第28-31页 |
| 2.1.3 实验所用培养基及配方 | 第31-32页 |
| 2.1.4 实验所用其他材料及试剂盒 | 第32页 |
| 2.1.5 实验仪器和设备 | 第32-34页 |
| 2.2 实验技术路线 | 第34-36页 |
| 2.2.1 表达质粒p PFab-ACFab的构建 | 第34页 |
| 2.2.2 表达菌株W3117-pPFab-ACFab的构建及表达纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.3 增强ACFab可溶性表达的条件优化 | 第35-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-47页 |
| 2.3.1 目的基因ACFab的 DNA序列的获得 | 第36-38页 |
| 2.3.2 重组质粒p PFab-ACFab的构建 | 第38-40页 |
| 2.3.3 TG1 化学转化感受态细胞的制备 | 第40-41页 |
| 2.3.4 重组质粒转化TG1 感受态细胞及筛选鉴定 | 第41-42页 |
| 2.3.5 W3117 电转化感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| 2.3.6 重组质粒p PFab-ACFab电转化W3117 感受态细胞及筛选 | 第43-44页 |
| 2.3.7 高表达的W3117-pPFab-ACFab的菌株筛选 | 第44-45页 |
| 2.3.8 ACFab的初试表达及Protein L纯化 | 第45-46页 |
| 2.3.9 增强ACFab分泌速率的优化探究实验 | 第46页 |
| 2.3.10 ACFab的精细纯化 | 第46-47页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第47-78页 |
| 2.4.1 载体质粒p PFab的琼脂糖凝胶电泳检测结果 | 第47-48页 |
| 2.4.2 目的基因ACFab的 PCR扩增及胶回收结果 | 第48-49页 |
| 2.4.3 载体质粒p PFab的双酶切及胶回收检测结果 | 第49页 |
| 2.4.4 重组质粒p PFab-ACFab的菌落PCR检测结果 | 第49-50页 |
| 2.4.5 重组质粒p PFab-ACFab的测序比对结果 | 第50-51页 |
| 2.4.6 ACFab的 SDS-PAGE和 Western Blot检测结果 | 第51-53页 |
| 2.4.7 高表达的W3117-pPFab-ACFab的菌株筛选结果 | 第53-54页 |
| 2.4.8 ACFab的初试表达及Protein L亲和纯化结果 | 第54-55页 |
| 2.4.9 不同温度条件对增强ACFab分泌效率的影响结果 | 第55-57页 |
| 2.4.10 Tween-80 对增强ACFab分泌效率的影响结果 | 第57-61页 |
| 2.4.11 TritonX-100 对增强ACFab分泌效率的影响结果 | 第61-65页 |
| 2.4.12 钙离子对增强ACFab分泌效率的影响结果 | 第65-69页 |
| 2.4.13 链霉素对增强ACFab分泌效率的影响结果 | 第69-72页 |
| 2.4.14 多因素正交实验中ACFab有效分泌表达量的对比结果 | 第72-76页 |
| 2.4.15 优化后ACFab的 Protein L亲和纯化结果 | 第76-77页 |
| 2.4.16 ACFab的 Nano SP阳离子精细纯化结果 | 第77-78页 |
| 2.5 本章小结 | 第78-80页 |
| 2.5.1 结果 | 第78-79页 |
| 2.5.2 讨论 | 第79-80页 |
| 第三章 ACFab的位点特异性聚乙二醇修饰及纯化 | 第80-98页 |
| 3.1 实验材料与设备 | 第80-81页 |
| 3.1.1 实验试剂及配方 | 第80页 |
| 3.1.2 实验仪器和设备 | 第80-81页 |
| 3.2 实验技术路线 | 第81-82页 |
| 3.3 实验方法 | 第82-87页 |
| 3.3.1 ACFab产品的浓缩 | 第82页 |
| 3.3.2 β-巯基乙胺作用浓度的确定 | 第82-83页 |
| 3.3.3 β-巯基乙胺还原后Fab片段的脱盐纯化 | 第83-84页 |
| 3.3.4 Fab-PEG 修饰产物正交实验 | 第84-86页 |
| 3.3.5 PEG修饰产物类型的鉴定 | 第86-87页 |
| 3.3.6 Fab-PEG修饰产物的分离纯化 | 第87页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第87-96页 |
| 3.4.1 Anti-CGRP抗体Fab片段超滤浓缩结果 | 第87-88页 |
| 3.4.2 β-巯基乙胺作用浓度范围测定结果 | 第88-89页 |
| 3.4.3 β-巯基乙胺还原后ACFab的脱盐纯化结果 | 第89-90页 |
| 3.4.4 Fab-PEG修饰产物正交实验结果 | 第90-93页 |
| 3.4.5 PEG修饰产物类型的鉴定结果 | 第93-94页 |
| 3.4.6 Fab-PEG修饰产物的分离纯化结果 | 第94-96页 |
| 3.5 本章小结 | 第96-98页 |
| 3.5.1 结果 | 第96-97页 |
| 3.5.2 讨论 | 第97-98页 |
| 第四章 ACFab及其PEG修饰产物的亲和力检测 | 第98-104页 |
| 4.1 实验材料与设备 | 第98页 |
| 4.1.1 实验试剂及配方 | 第98页 |
| 4.1.2 实验仪器和设备 | 第98页 |
| 4.2 实验方法 | 第98-99页 |
| 4.2.1 ACFab的亲和力检测 | 第98-99页 |
| 4.2.2 ACFab-PEG修饰产物的亲和力检测 | 第99页 |
| 4.2.3 亲和常数的计算 | 第99页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第99-102页 |
| 4.3.1 ACFab的亲和力检测及亲和常数的计算 | 第99-101页 |
| 4.3.2 ACFab-PEG修饰产物的亲和力检测及亲和常数的计算 | 第101-102页 |
| 4.4 本章小结 | 第102-104页 |
| 第五章 结论与展望 | 第104-107页 |
| 5.1 结论 | 第104-105页 |
| 5.2 展望 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-113页 |
| 个人简历 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
