中文摘要 | 第4-5页 |
英文摘要 | 第5-12页 |
第一章 前言 | 第12-23页 |
1.1 流行病学 | 第12页 |
1.2 先天免疫模式识别受体 | 第12-14页 |
1.3 炎性小体NLRP3 | 第14-17页 |
1.4 炎性小体NLRP6及其相关研究 | 第17-18页 |
1.5 P53分子及其相关研究 | 第18-21页 |
1.5.1 P53分子概述 | 第18-19页 |
1.5.2 P53在细胞周期中作用 | 第19-20页 |
1.5.3 P53在细胞凋亡中作用 | 第20-21页 |
1.5.4 P53在细胞自噬中作用 | 第21页 |
1.6 小结 | 第21-23页 |
第二章 实验材料与方法 | 第23-46页 |
2.1 主要实验材料 | 第23-28页 |
2.1.1 细胞株来源 | 第23页 |
2.1.2 质粒来源 | 第23页 |
2.1.3 实验仪器 | 第23页 |
2.1.4 实验试剂耗材 | 第23-25页 |
2.1.5 实验主要抗体 | 第25-26页 |
2.1.6 实验试剂配制 | 第26-28页 |
2.1.7 PCR引物 | 第28页 |
2.2 细胞培养 | 第28-30页 |
2.2.1 细胞复苏 | 第28-29页 |
2.2.2 细胞传代 | 第29页 |
2.2.3 细胞冻存 | 第29-30页 |
2.3 慢病毒包装相关实验 | 第30-36页 |
2.3.1 感受态细胞的制备 | 第30页 |
2.3.2 质粒转化 | 第30-31页 |
2.3.3 质粒小量提取 | 第31-32页 |
2.3.4 质粒中量提取 | 第32-33页 |
2.3.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
2.3.6 DNA片段的胶回收 | 第33-34页 |
2.3.7 DNA连接实验 | 第34页 |
2.3.8 PEI质粒转染 | 第34-35页 |
2.3.9 Lipofectamine细胞转染 | 第35页 |
2.3.10 慢病毒感染细胞预实验 | 第35-36页 |
2.3.11 嘌呤霉素适合浓度测定 | 第36页 |
2.3.12 慢病毒感染正式实验 | 第36页 |
2.4 基因水平实验 | 第36-39页 |
2.4.1 细胞RNA的提取 | 第36-37页 |
2.4.2 RNA样本浓度与纯度测算 | 第37页 |
2.4.3 逆转录 | 第37-38页 |
2.4.4 Real-Time PCR | 第38-39页 |
2.5 蛋白水平相关实验 | 第39-42页 |
2.5.1 提取细胞蛋白 | 第39-40页 |
2.5.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第40页 |
2.5.3 Western-blot实验操作 | 第40-42页 |
2.6 细胞相关实验 | 第42-45页 |
2.6.1 细胞增殖检测(Cell Counting Kit-8,CCK-8) | 第42页 |
2.6.2 Transwell实验 | 第42-43页 |
2.6.3 细胞免疫荧光 | 第43-44页 |
2.6.4 流式细胞术-细胞凋亡测定 | 第44-45页 |
2.7 小鼠相关实验 | 第45页 |
2.8 统计分析方法 | 第45-46页 |
第三章 实验结果与分析 | 第46-57页 |
3.1 慢病毒感染结直肠癌细胞 | 第46-47页 |
3.2 Real-Time PCR检测基因水平表达情况 | 第47-48页 |
3.3 Western Blot检测蛋白水平表达情况 | 第48-50页 |
3.4 细胞的增殖检测实验 | 第50-51页 |
3.5 Transwell实验 | 第51-53页 |
3.6 流式细胞术检测结直肠癌凋亡 | 第53-54页 |
3.7 细胞免疫荧光实验 | 第54页 |
3.8 裸鼠体内成瘤实验 | 第54-57页 |
第四章 讨论与展望 | 第57-59页 |
第五章 结论 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-76页 |
英文缩写表 | 第76-80页 |
致谢 | 第80-81页 |
科研成果 | 第81页 |