| 摘要 | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-16页 |
| 1.1 植物油脂合成积累的生物化学过程 | 第10-11页 |
| 1.2 植物转录因子WRI1的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.1 植物转录因子WRI1特征 | 第11页 |
| 1.2.2 WRI1在拟南芥和其他植物的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.3 WRI1下游基因及油脂合成的调控 | 第12页 |
| 1.3 选择性剪接 | 第12-13页 |
| 1.3.1 选择性剪接的种类 | 第12-13页 |
| 1.3.2 可变剪接分子机理及功能 | 第13页 |
| 1.4 本研究目的、意义及主要内容 | 第13-15页 |
| 1.5 本研究的技术路线 | 第15-16页 |
| 第二章 蓖麻RcWRI1-A和RcWRI1-B的鉴定及克隆 | 第16-30页 |
| 2.1 材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第16页 |
| 2.1.2 载体及菌种 | 第16页 |
| 2.1.3 主要生化试剂 | 第16页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第16页 |
| 2.1.5 引物序列 | 第16-17页 |
| 2.2 方法 | 第17-22页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第17页 |
| 2.2.1.1 序列鉴定 | 第17页 |
| 2.2.1.2 理化性质及结构域分析 | 第17页 |
| 2.2.1.3 系统发育分析 | 第17页 |
| 2.2.2 RcWRI1-A和RcWRI1-B的表达分析 | 第17-22页 |
| 2.2.2.1 蓖麻不同组织总RNA的提取与检测 | 第17-18页 |
| 2.2.2.2 RT-PCR扩增 | 第18-19页 |
| 2.2.2.3 qPCR分析 | 第19页 |
| 2.2.2.4 凝胶电泳检测及PCR产物纯化 | 第19-20页 |
| 2.2.2.5 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第20页 |
| 2.2.2.6 克隆载体构建及转化 | 第20-21页 |
| 2.2.2.7 阳性重组子鉴定及测序 | 第21-22页 |
| 2.3 结果与分析 | 第22-27页 |
| 2.3.1 蛋白质理化性质分析 | 第22-23页 |
| 2.3.2 蛋白质多序列比对分析 | 第23-24页 |
| 2.3.3 结构域分析 | 第24-25页 |
| 2.3.4 系统发育分析 | 第25-26页 |
| 2.3.5 蓖麻不同组织RNA提取质量的检测 | 第26页 |
| 2.3.6 RcWRI1-A和RcWRI1-B不同组织的表达分析 | 第26-27页 |
| 2.3.7 RcWRI1-A和RcWRI1-B基因的ORF克隆 | 第27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-28页 |
| 2.5 结论 | 第28-30页 |
| 第三章 RcWRI1s在拟南芥wri1-1突变体中功能鉴定 | 第30-39页 |
| 3.1 材料 | 第30页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第30页 |
| 3.1.2 载体与菌种 | 第30页 |
| 3.1.3 主要生化试剂 | 第30页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第30页 |
| 3.1.5 引物序列 | 第30页 |
| 3.2 方法 | 第30-34页 |
| 3.2.1 目的基因片段和表达载体pJC-Gly-DsRED的富集与纯化 | 第30-31页 |
| 3.2.2 目的基因片段和pJC-Gly-DsRED质粒双酶切及连接 | 第31-32页 |
| 3.2.3 根癌农杆菌GV3101感受态制备及转化 | 第32-33页 |
| 3.2.3.1 农杆菌GV3101感受态细胞制备 | 第32页 |
| 3.2.3.2 冻融法转化农杆菌 | 第32-33页 |
| 3.2.4 农杆菌花序浸染法转化拟南芥 | 第33页 |
| 3.2.5 TPS法提取植物DNA | 第33-34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-36页 |
| 3.3.1 pJC-Gly-DsRED-RcWRI1s植物表达载体的构建 | 第34页 |
| 3.3.2 植物表达载体鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3.3 转基因拟南芥纯合株系鉴定 | 第35页 |
| 3.3.4 转基因拟南芥种子表型鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-37页 |
| 3.5 结论 | 第37-39页 |
| 第四章 RcWRI1s在普通烟草中的遗传转化及表型鉴定 | 第39-52页 |
| 4.1 材料 | 第39-40页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 4.1.2 载体与菌种 | 第39页 |
| 4.1.3 主要生化试剂 | 第39页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第39页 |
| 4.1.5 引物序列 | 第39-40页 |
| 4.2 方法 | 第40-43页 |
| 4.2.1 pCAMBIA1303-RcWRI1s植物表达载体构建及鉴定 | 第40页 |
| 4.2.2 农杆菌菌液的制备及烟草叶片的侵染 | 第40-41页 |
| 4.2.3 转基因烟草阳性植株鉴定 | 第41页 |
| 4.2.4 烟草叶片总脂肪酸含量及脂肪酸组分的测定 | 第41-42页 |
| 4.2.5 烟叶总淀粉含量的测定 | 第42页 |
| 4.2.6 烟叶总蛋白含量的测定 | 第42-43页 |
| 4.3 结果与分析 | 第43-49页 |
| 4.3.1 RcWRI1-A和RcWRI1-B在烟草中遗传转化 | 第43-46页 |
| 4.3.1.1 pCAMBIA1303-RcWRI1s植物表达载体的构建与鉴定 | 第43-45页 |
| 4.3.1.3 转基因烟草DNA和RNA水平分子鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3.2 RcWRI1s转基因烟草表型测定 | 第46-49页 |
| 4.3.2.1 RcWRI1-A和RcWRI1-B在转基因烟草中的相对表达量 | 第46页 |
| 4.3.2.2 转基因烟叶中WRI1下游靶基因的表达分析 | 第46-47页 |
| 4.3.2.3 转基因烟叶总脂肪酸含量分析 | 第47-48页 |
| 4.3.2.4 转基因烟叶脂肪酸成分分析 | 第48页 |
| 4.3.2.5 转基因烟叶淀粉含量分析 | 第48-49页 |
| 4.3.2.6 转基因烟叶总蛋白含量分析 | 第49页 |
| 4.4 讨论 | 第49-51页 |
| 4.5 结论 | 第51-52页 |
| 第五章 全文总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| Abstract | 第56-57页 |
| 硕士期间发表的学术论文 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
