| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第12-31页 |
| 1.1 G蛋白 | 第12-13页 |
| 1.2 Rab GTPase家族 | 第13-27页 |
| 1.2.1 Rab GTP的保守结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 Rab GTP循环的调节 | 第17-19页 |
| 1.2.3 Rab蛋白的亚细胞定位 | 第19-20页 |
| 1.2.4 Rab蛋白在囊泡运输中的作用 | 第20-25页 |
| 1.2.5 Rab蛋白的其他作用 | 第25页 |
| 1.2.6 Rab蛋白与疾病 | 第25-27页 |
| 1.3 Rab15蛋白 | 第27-29页 |
| 1.3.1 Rab15蛋白的结构 | 第27-28页 |
| 1.3.2 Rab15蛋白抑制细胞早期内吞 | 第28-29页 |
| 1.3.3 Rab15蛋白与效应物合作驱动胞吐作用 | 第29页 |
| 1.3.4 Rab15蛋白与神经分化有显著相关性 | 第29页 |
| 1.4 本论文的研究目的与意义 | 第29-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-40页 |
| 2.1.1 实验菌株、细胞、质粒和引物 | 第31-32页 |
| 2.1.2 抗体 | 第32-33页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第33-35页 |
| 2.1.4 常用溶液组分 | 第35-39页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第39-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-53页 |
| 2.2.1 常用标签表达载体的构建 | 第40-45页 |
| 2.2.2 Rab15 ShRNA真核细胞表达载体的构建 | 第45页 |
| 2.2.3 细胞培养技术 | 第45-47页 |
| 2.2.4 细胞转染 | 第47页 |
| 2.2.5 裂解细胞收样 | 第47页 |
| 2.2.6 慢病毒包装与浓缩 | 第47-48页 |
| 2.2.7 细胞计数 | 第48页 |
| 2.2.8 MTT法测生长曲线 | 第48页 |
| 2.2.9 结晶紫染色法 | 第48-49页 |
| 2.2.10 细胞愈伤实验 | 第49页 |
| 2.2.11 小室内细胞侵袭实验 | 第49页 |
| 2.2.12 免疫荧光 | 第49-50页 |
| 2.2.13 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第50-51页 |
| 2.2.14 免疫印迹 | 第51页 |
| 2.2.15 EGFR降解 | 第51-53页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第53-77页 |
| 3.1. Rab15在组织样本中的表达分析 | 第53-56页 |
| 3.1.1 Rab15蛋白在肝组织中的表达 | 第53-54页 |
| 3.1.2 Rab15蛋白表达与临床病例特征的关系 | 第54-56页 |
| 3.2. Rab15细胞表达分析 | 第56-57页 |
| 3.3. Rab15相关载体的构建 | 第57-62页 |
| 3.3.1 pEGFP-C1-Rab15 WT质粒的构建 | 第57-58页 |
| 3.3.2 pEGFP-C1-Rab15 T22N和Q67L质粒的构建 | 第58-60页 |
| 3.3.3 pEGFP-C1-Rab15真核表达载体的表达鉴定 | 第60-62页 |
| 3.3.4 Rab15 ShRNA载体的构建 | 第62页 |
| 3.4. Rab15蛋白与高尔基体共定位 | 第62-66页 |
| 3.4.1 EGFP-Rab15在HELA细胞中的共定位情况 | 第62-63页 |
| 3.4.2 EGFP-Rab15在MCF7细胞中的共定位情况 | 第63-64页 |
| 3.4.3 EGFP-Rab15在NRK细胞中的共定位情况 | 第64-66页 |
| 3.5. 过表达Rab15抑制高侵袭乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长 | 第66-69页 |
| 3.5.1 细胞计数法绘制细胞生长曲线 | 第66页 |
| 3.5.2 MTT法测细胞生长活性 | 第66-68页 |
| 3.5.3 结晶紫染色法 | 第68页 |
| 3.5.4 检测EGFR蛋白含量 | 第68-69页 |
| 3.6. 过表达Rab15抑制乳腺癌细胞的迁移 | 第69-77页 |
| 3.6.1 划痕愈伤实验 | 第69-71页 |
| 3.6.2 小室内细胞迁移/侵袭实验 | 第71-73页 |
| 3.6.3 检测E-cadherin/N-cadherin蛋白含量 | 第73-74页 |
| 3.6.4 检测ITGB1蛋白含量 | 第74-75页 |
| 3.6.5 检测MMP2蛋白含量 | 第75-77页 |
| 第四章 讨论 | 第77-80页 |
| 第五章 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
| 附录 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
