| 摘要 | 第10-11页 |
| ABSTRACT | 第11页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 RHOBTB3的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 RHOBTB的家族成员和结构 | 第12-13页 |
| 1.1.2 RHOBTB3的组织分布 | 第13页 |
| 1.1.3 RHOBTB3的功能 | 第13-15页 |
| 1.1.4 RHOBTB与肿瘤 | 第15页 |
| 1.2 COX11背景 | 第15-19页 |
| 1.2.1 电子传递链 | 第15-16页 |
| 1.2.2 COX11背景 | 第16-19页 |
| 1.2.2.1 COX11简介 | 第16-18页 |
| 1.2.2.2 COX11功能 | 第18页 |
| 1.2.2.3 COX11与疾病 | 第18-19页 |
| 1.3 酵母双杂交系统及其应用 | 第19-26页 |
| 1.3.1 酵母双杂交系统基本原理 | 第19-20页 |
| 1.3.2 酵母双杂交系统的特点和应用 | 第20-22页 |
| 1.3.3 MATCHMAKER GAL4 TWO-Hybrid System3简介 | 第22-26页 |
| 第二章 材料和方法 | 第26-49页 |
| 2.1 常用药品和试剂 | 第26页 |
| 2.2 DNA相关实验及方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 质粒载体 | 第26-29页 |
| 2.2.2 大肠杆菌(E. coli)感受态细胞(Competent Cell)的制备和DNA转化(Transformation) | 第29-30页 |
| 2.2.3 质粒DNA的提取 | 第30-33页 |
| 2.2.4 质粒DNA的工具酶处理 | 第33-34页 |
| 2.2.5 DNA片段的纯化和回收 | 第34-36页 |
| 2.2.6 DNA连接反应 | 第36页 |
| 2.2.7 PCR相关实验 | 第36页 |
| 2.3 酵母双杂交相关实验方法 | 第36-42页 |
| 2.3.1 酵母菌株和培养基 | 第36-37页 |
| 2.3.2 诱饵基因表达蛋白样品制备 | 第37-38页 |
| 2.3.3 诱饵蛋白检测试验 | 第38页 |
| 2.3.4 两种酵母菌株杂交实验 | 第38-40页 |
| 2.3.5 酵母质粒的提取 | 第40-41页 |
| 2.3.6 酵母感受态细胞的制备及质粒DNA的转化 | 第41-42页 |
| 2.3.7 数据计算 | 第42页 |
| 2.4 细胞培养及转染 | 第42-44页 |
| 2.4.1 细胞培养 | 第42-43页 |
| 2.4.2 瞬时转染 | 第43-44页 |
| 2.4.3 慢病毒感染 | 第44页 |
| 2.5 蛋白质相关实验方法 | 第44-49页 |
| 2.5.1 免疫共沉淀 | 第44-46页 |
| 2.5.2 蛋白质的SDS-PAGE电泳与western blot分析 | 第46-47页 |
| 2.5.3 细胞免疫荧光实验 | 第47页 |
| 2.5.6 分离提纯pure线粒体以及线粒体周边的膜 | 第47-48页 |
| 2.5.7 利用不连续的蔗糖梯度分离细胞组分 | 第48-49页 |
| 第三章 结果与分析 | 第49-67页 |
| 3.1 酵母双杂交部分 | 第49-54页 |
| 3.1.1 诱饵蛋白表达质粒的构建 | 第49页 |
| 3.1.2 诱饵蛋白表达 | 第49-50页 |
| 3.1.3 诱饵蛋白毒性检测 | 第50页 |
| 3.1.4 诱饵蛋白自激活检测 | 第50页 |
| 3.1.5 鼠脑cDNA文库的筛选 | 第50-51页 |
| 3.1.6 文库质粒酶切鉴定 | 第51-52页 |
| 3.1.7 酵母中重新检验蛋白相互作用 | 第52页 |
| 3.1.8 测序、序列比对 | 第52-54页 |
| 3.2 利用哺乳动物细胞验证蛋白间的相互作用 | 第54-56页 |
| 3.2.1 构建哺乳动物细胞的ATG4D,COX11,NOMO1,ATP5C,UBXN1基因 | 第54页 |
| 3.2.2 免疫共沉淀验证蛋白间相互作用 | 第54-56页 |
| 3.3 RHOBTB3与COX11相互作用 | 第56-62页 |
| 3.3.1 N-TAG COX11和C-TAG COX11克隆的构建 | 第56-57页 |
| 3.3.2 N-TAG-COX11弥散的分布在整个细胞中没有正确的线粒体定位 | 第57页 |
| 3.3.3 C-TAG-COX11正确定位在线粒体上表达3种形式的条带 | 第57-62页 |
| 3.4 COX11三种形式的蛋白有不同的亚细胞定位 | 第62-63页 |
| 3.4.1 COX11 M-FORM和S-FORM定位在线粒体上 | 第62-63页 |
| 3.4.2 COX11 L-FORM定位在高尔基上 | 第63页 |
| 3.5 葡萄糖饥饿刺激下L-FORM的减弱导致与RHOBTB3相互作用的减弱 | 第63-64页 |
| 3.6 基因沉默COX11降低了细胞中的ATP水平 | 第64-65页 |
| 3.7 RHOBTB3缺失后细胞中ATP水平下降 | 第65-66页 |
| 3.8 结果讨论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
