| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号及缩略语说明 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-31页 |
| 第一节 三叶青种质资源研究现状 | 第15-20页 |
| 1 三叶青种质鉴别研究进展 | 第15-16页 |
| 1.1 外观形态、显微及理化鉴别 | 第15页 |
| 1.2 DNA条形码技术 | 第15-16页 |
| 1.3 位点特异性鉴别PCR | 第16页 |
| 2 三叶青药理活性研究进展 | 第16-18页 |
| 2.1 抗病毒活性 | 第16页 |
| 2.2 抗炎、解热、镇痛活性 | 第16-17页 |
| 2.3 抗肝损伤活性 | 第17页 |
| 2.4 免疫调节活性 | 第17页 |
| 2.5 抗肿瘤活性 | 第17-18页 |
| 3 三叶青抗肿瘤作用机制研究进展 | 第18-19页 |
| 3.1 调节免疫 | 第18页 |
| 3.2 诱导细胞凋亡 | 第18-19页 |
| 4 三叶青组培快繁、悬浮细胞培养技术研究进展 | 第19-20页 |
| 第二节 中药鉴定研究现状 | 第20-24页 |
| 1 传统的中药鉴定方法 | 第20-22页 |
| 1.1 基原鉴定 | 第20页 |
| 1.2 性状鉴定 | 第20-21页 |
| 1.3 显微鉴定 | 第21页 |
| 1.4 理化鉴定 | 第21-22页 |
| 2 现代分子生物学鉴别方法 | 第22-24页 |
| 2.1 DNA分子标记技术 | 第22-23页 |
| 2.2 位点特异性鉴别PCR | 第23页 |
| 2.3 CAPS(PCR-RFLP)方法 | 第23页 |
| 2.4 DNA条形码技术 | 第23-24页 |
| 2.5 其它分子鉴别技术 | 第24页 |
| 第三节 中药抗肿瘤分子机制的研究现状 | 第24-27页 |
| 1 诱导细胞凋亡 | 第24-26页 |
| 1.1 诱导凋亡的信号通路 | 第24-25页 |
| 1.2 诱导凋亡信号通路的作用机制 | 第25-26页 |
| 2 阻断细胞周期 | 第26页 |
| 3 免疫调节 | 第26-27页 |
| 4 抑制肿瘤血管生成 | 第27页 |
| 5 其它抗肿瘤作用机制 | 第27页 |
| 第四节 药用植物悬浮细胞培养生产次级代谢产物的研究进展 | 第27-31页 |
| 1 药用植物细胞悬浮培养条件的优化 | 第28页 |
| 1.1 悬浮培养中物理因素的优化 | 第28页 |
| 1.2 悬浮培养中化学因素的优化 | 第28页 |
| 2 添加诱导子提高次生代谢产物含量 | 第28-30页 |
| 2.1 生物诱导子 | 第29页 |
| 2.2 非生物诱导子 | 第29-30页 |
| 3 添加前体提高次生代谢产物含量 | 第30-31页 |
| 第二章 三叶青的分子生物学鉴别 | 第31-49页 |
| 第一节 ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选 | 第31-39页 |
| 1 材料与方法 | 第31-34页 |
| 1.1 材料 | 第31-32页 |
| 1.2 仪器与试剂 | 第32页 |
| 1.3 实验方法 | 第32-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-38页 |
| 2.1 单因素试验结果 | 第34-36页 |
| 2.2 PCR正交设计结果 | 第36-38页 |
| 3 讨论 | 第38-39页 |
| 3.1 PCR体系的影响因素 | 第38-39页 |
| 3.2 单因子和正交试验分析 | 第39页 |
| 第二节 基于ISSR、CAPS和ITS_2条形码的三叶青种质鉴别 | 第39-49页 |
| 1 材料与方法 | 第39-41页 |
| 1.1 材料 | 第39-40页 |
| 1.2 仪器与试剂 | 第40页 |
| 1.3 实验方法 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-47页 |
| 2.1 ISSR-PCR指纹图谱分析 | 第41-44页 |
| 2.2 ITS_2序列比较及聚类分析 | 第44-46页 |
| 2.3 CAPS鉴别结果分析 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 三叶青活性组份诱导肝癌HepG_2细胞周期阻滞及凋亡 | 第49-61页 |
| 1 材料与方法 | 第49-52页 |
| 1.1 细胞株 | 第49页 |
| 1.2 仪器与试剂 | 第49-50页 |
| 1.3 实验方法 | 第50-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-58页 |
| 2.1 EET对HepG_2细胞增殖的影响 | 第52-53页 |
| 2.2 EET对HepG_2细胞形态学的影响 | 第53-55页 |
| 2.3 EET诱导HepG_2细胞凋亡的DNA Ladder分析 | 第55页 |
| 2.4 EET对HepG_2细胞周期及周期转换的关键蛋白CDK_2表达的影响 | 第55-58页 |
| 3 讨论 | 第58-61页 |
| 3.1 EET诱导肿瘤细胞凋亡活性 | 第58-59页 |
| 3.2 EET阻滞肿瘤细胞周期活性 | 第59-61页 |
| 第四章 三叶青活性组份诱导肝癌HepG_2细胞凋亡的分子机制 | 第61-75页 |
| 1 材料与方法 | 第61-63页 |
| 1.1 细胞株 | 第61页 |
| 1.2 仪器与试剂 | 第61-62页 |
| 1.3 实验方法 | 第62-63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-71页 |
| 2.1 EET单独处理以及与Caspase抑制剂联合使用的细胞凋亡率变化 | 第63-64页 |
| 2.2 EET处理对Caspase酶活力的影响 | 第64-66页 |
| 2.3 EET处理对凋亡相关蛋白表达水平的影响 | 第66-68页 |
| 2.4 线粒体膜电位下降及细胞色素C的释放 | 第68-70页 |
| 2.5 胞内游离Ca~(2+)浓度变化 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-75页 |
| 3.1 细胞凋亡信号通路 | 第71-72页 |
| 3.2 依赖线粒体/细胞色素C的Caspase信号途径 | 第72-75页 |
| 第五章 外源Ca~(2+)对金属离子诱导三叶青悬浮细胞产黄酮的影响 | 第75-85页 |
| 1 材料与方法 | 第75-77页 |
| 1.1 材料 | 第75-76页 |
| 1.2 仪器与试剂 | 第76页 |
| 1.3 实验方法 | 第76-77页 |
| 2 结果与分析 | 第77-82页 |
| 2.1 各诱导子对细胞生长及黄酮积累的影响 | 第77-79页 |
| 2.3 外源Ca~(2+)浓度对诱导子诱导细胞生长和黄酮积累的影响 | 第79-80页 |
| 2.4 Ca~(2+)拮抗剂或离子载体对细胞生长及黄酮积累的影响及其与诱导子协同诱导的效果 | 第80-81页 |
| 2.5 Ca~(2+)浓度对诱导子作用下H_2O_2含量及POD活性变化的影响 | 第81-82页 |
| 3 讨论 | 第82-85页 |
| 3.1 金属离子和稀土离子对植物细胞生长及次生代谢的影响 | 第82页 |
| 3.2 Ca~(2+)流对植物次生代谢的影响 | 第82-85页 |
| 全文结论 | 第85-87页 |
| 1 三叶青种质鉴别 | 第85页 |
| 2 三叶青抗肿瘤分子机制 | 第85-86页 |
| 3 金属离子对三叶青悬浮细胞生长及黄酮合成的诱导作用及其与Ca~(2+)流变化的关系 | 第86-87页 |
| 创新点 | 第87-88页 |
| 1 建立了三叶青及其伪混品的分子鉴别方法 | 第87页 |
| 2 发现了三叶青提取物抑制人肝癌HepG_2细胞增殖的作用机制 | 第87页 |
| 3 探索了利用细胞培养方法进行三叶青次生代谢产物的生产 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
