| 摘要 | 第14-19页 |
| Abstract | 第19-24页 |
| 缩写词表 | 第25-26页 |
| 第一章 研究背景 | 第26-46页 |
| 1.1 纤维素的开发和利用 | 第26页 |
| 1.2 纤维素的微生物降解 | 第26-27页 |
| 1.2.1 纤维素降解真菌 | 第26-27页 |
| 1.2.2 纤维素降解细菌 | 第27页 |
| 1.3 纤维素酶 | 第27-28页 |
| 1.4 纤维素降解机制 | 第28-30页 |
| 1.4.1 游离纤维素酶协同机制 | 第28页 |
| 1.4.2 纤维小体降解机制 | 第28-29页 |
| 1.4.3 第三种降解机制 | 第29-30页 |
| 1.5 IX型分泌系统 | 第30-31页 |
| 1.6 DegQ | 第31-37页 |
| 1.6.1 原核生物中htrA的功能 | 第31-32页 |
| 1.6.2 真核生物中htrA的功能 | 第32页 |
| 1.6.3 htrA的生物信息学分析 | 第32-37页 |
| 1.7 Tol-Pal system | 第37-41页 |
| 1.7.1 Tol-Pal系统的结构和功能 | 第37-38页 |
| 1.7.2 Pal的结构和功能 | 第38-39页 |
| 1.7.3 外膜囊泡(OMVs) | 第39-41页 |
| 1.8 Cytophaga hutchinsonii研究背景 | 第41-44页 |
| 1.8.1 Cytophaga hutchinsonii的分类学地位及特征 | 第41-42页 |
| 1.8.2 Cytophaga hutchinsonii的研究进展 | 第42-44页 |
| 1.9 论文立题和工作思路 | 第44-46页 |
| 第二章 热激蛋白ChuDegQ的性质研究 | 第46-78页 |
| 2.1 材料和方法 | 第46-57页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第46-47页 |
| 2.1.2 实验中用到的引物 | 第47页 |
| 2.1.3 主要试剂和仪器 | 第47-48页 |
| 2.1.4 培养条件 | 第48-49页 |
| 2.1.5 分子生物学反应体系及操作 | 第49-50页 |
| 2.1.6 E.coli感受态的制备及热激转化 | 第50页 |
| 2.1.7 蛋白序列分析 | 第50-51页 |
| 2.1.8 目的蛋白的诱导表达和纯化 | 第51-52页 |
| 2.1.9 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第52-53页 |
| 2.1.10 蛋白酶活力测定 | 第53-54页 |
| 2.1.11 类伴侣活力的测定 | 第54页 |
| 2.1.12 复性MalS能力的测定 | 第54-55页 |
| 2.1.13 Lysozyme活力的测定 | 第55页 |
| 2.1.14 周质空间蛋白的提取方法 | 第55-56页 |
| 2.1.15 外膜蛋白的提取方法 | 第56页 |
| 2.1.16 Size-Exclusion Chromatography(SEC) | 第56页 |
| 2.1.17 LC/MS-MS实验流程和数据分析 | 第56-57页 |
| 2.2 实验结果 | 第57-74页 |
| 2.2.1 C.hutchinsonii ChuDegQ的序列分析 | 第57-59页 |
| 2.2.2 ChuDegQ的异源表达和纯化 | 第59-60页 |
| 2.2.3 ChuDegQ的基本性质 | 第60-62页 |
| 2.2.4 ChuDegQ识别底物的特点 | 第62-64页 |
| 2.2.5 ChuDegQ聚合状态的变化 | 第64-65页 |
| 2.2.6 三聚体和笼形结构的酶活力和分子伴侣功能比较 | 第65-69页 |
| 2.2.7 ChuDegQ与EcDegQ和EcDegP酶活力的比较 | 第69-72页 |
| 2.2.8 ChuDegQ在C.hutchinsonii中的底物 | 第72-74页 |
| 2.3 讨论 | 第74-78页 |
| 2.3.1 ChuDegQ是一个htrA家族蛋白 | 第74-75页 |
| 2.3.2 不同聚集状态下的ChuDegQ的蛋白酶活力和伴侣活力 | 第75-76页 |
| 2.3.3 ChuDegQ的模型图 | 第76-78页 |
| 第三章 C. hutchinsonii肽聚糖相关脂蛋白的功能研究 | 第78-108页 |
| 3.1 材料和方法 | 第78-91页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第78-79页 |
| 3.1.2 实验中用到的引物 | 第79-81页 |
| 3.1.3 主要试剂和仪器 | 第81-82页 |
| 3.1.4 培养条件 | 第82页 |
| 3.1.5 分子生物学反应体系及操作 | 第82-83页 |
| 3.1.6 E.coli感受态的制备及热激转化 | 第83页 |
| 3.1.7 C. hutchinsonii感受态细胞的制备及电击转化 | 第83-84页 |
| 3.1.8 再生无定形纤维素(RAC)的制备 | 第84页 |
| 3.1.9 C.hutchinsonii生长曲线的测定 | 第84-86页 |
| 3.1.10 纤维素利用率的测定 | 第86页 |
| 3.1.11 XRD测定纤维素粉的结晶度 | 第86页 |
| 3.1.12 滤纸降解实验 | 第86-87页 |
| 3.1.13 扫描电子显微镜(SEM)的使用 | 第87页 |
| 3.1.14 纤维素酶活测定 | 第87-88页 |
| 3.1.15 药敏实验 | 第88页 |
| 3.1.16 囊泡的定量 | 第88-89页 |
| 3.1.17 蛋白定位 | 第89-90页 |
| 3.1.18 生物信息学分析 | 第90-91页 |
| 3.2 结果 | 第91-105页 |
| 3.2.1 C.hutchinsonii peptidoglycan-associated lipoprotein (Pal)生物信息学分析 | 第91-93页 |
| 3.2.2 C. hutchinsonii pal突变株的表型研究 | 第93-96页 |
| 3.2.3 pal的敲除影响C.hutchinsonii降解纤维素结晶区 | 第96-99页 |
| 3.2.4 pal的敲除影响C.hutchinsonii外膜完整性 | 第99-105页 |
| 3.2.5 CHU_3220的定位 | 第105页 |
| 3.3 讨论 | 第105-108页 |
| 第四章 C.hutchinsonii未知功能蛋白基因Hp_4的研究 | 第108-122页 |
| 4.1 材料与方法 | 第108-112页 |
| 4.1.1 菌种与质粒 | 第108-109页 |
| 4.1.2 实验中用到的引物 | 第109页 |
| 4.1.3 主要试剂和仪器 | 第109-110页 |
| 4.1.4 培养条件 | 第110-111页 |
| 4.1.5 分子生物学反应体系及操作 | 第111页 |
| 4.1.6 E.coli感受态的制备及热激转化 | 第111页 |
| 4.1.7 C.hutchinsonii感受态的制备及点击转化 | 第111页 |
| 4.1.8 C.hutchinsonii生长曲线的测定 | 第111页 |
| 4.1.9 C.hutchinsonii在软硬琼脂表明的扩散 | 第111页 |
| 4.1.10 滤纸降解检测 | 第111页 |
| 4.1.11 纤维素酶活测定 | 第111页 |
| 4.1.12 C.hutchinsonii外膜蛋白的提取 | 第111-112页 |
| 4.1.13 外膜吸附蛋白的提取 | 第112页 |
| 4.2 实验结果 | 第112-119页 |
| 4.2.1 C.hutchinsonii未知功能蛋白Hp_4生物信息学分析 | 第112-113页 |
| 4.2.2 C.hutchinsonii Hp_4突变株的表型研究 | 第113-117页 |
| 4.2.3 Hp_1-Hp_4基因簇的分析 | 第117-119页 |
| 4.3 讨论 | 第119-122页 |
| 全文总结及展望 | 第122-125页 |
| 附录 | 第125-128页 |
| 参考文献 | 第128-139页 |
| 在读期间发表学术论文 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第141页 |
