| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-28页 |
| 1.1 有机磷农药及有机磷水解酶 | 第15-20页 |
| 1.1.1 有机磷化合物的简介 | 第15-16页 |
| 1.1.2 有机磷农药的使用和危害 | 第16页 |
| 1.1.3 生物修复法消除有机磷农药的污染 | 第16-18页 |
| 1.1.4 有机磷水解酶的研究概况 | 第18-19页 |
| 1.1.5 有机磷水解酶的来源及分布 | 第19-20页 |
| 1.2 原核表达系统 | 第20-21页 |
| 1.3 表面展示技术概况 | 第21-23页 |
| 1.3.1 噬菌体表面展示技术 | 第21页 |
| 1.3.2 细菌表面展示技术 | 第21-22页 |
| 1.3.3 酵母展示系统 | 第22页 |
| 1.3.4 大肠杆菌表面展示系统 | 第22-23页 |
| 1.4 GFP研究概况 | 第23-28页 |
| 1.4.1 GFP的起源 | 第23页 |
| 1.4.2 GFP的性质,结构及研究现状 | 第23-24页 |
| 1.4.3 GFP的改进 | 第24页 |
| 1.4.4 GFP的应用 | 第24-25页 |
| 1.4.5 超折叠绿色荧光蛋白 | 第25-26页 |
| 1.4.6 本文研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第28-49页 |
| 2.1 材料 | 第28-34页 |
| 2.1.1 菌株 | 第28-29页 |
| 2.1.2 培养基 | 第29页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第29-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-49页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.2 大肠杆菌的转化 | 第35页 |
| 2.2.3 质粒DNA的抽提(碱裂解法) | 第35-36页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳检测及纯化回收DNA片段 | 第36页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE胶电泳检测蛋白质 | 第36-38页 |
| 2.2.6 Westem-blot | 第38-39页 |
| 2.2.7 免疫荧光标记 | 第39页 |
| 2.2.8 表达质粒pET23a-sfgfp-mphr的构建 | 第39-45页 |
| 2.2.9 MPH-R融合蛋白的表达和Western Blot检测 | 第45页 |
| 2.2.10 融合蛋白表面展示研究分析 | 第45-47页 |
| 2.2.11 全细胞的酶活性质 | 第47-49页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第49-65页 |
| 3.1 甲基对硫磷水解酶MPH-R的基因合成 | 第49-53页 |
| 3.1.1 在线软件对原始mph的序列进行分析和预测 | 第49-50页 |
| 3.1.2 优化序列与原始序列同源性对比 | 第50-52页 |
| 3.1.3 mph-R全基因合成 | 第52-53页 |
| 3.2 pET23a-sfgfp-mph表达质粒的构建和表达 | 第53-55页 |
| 3.2.1 构建表达质粒pET23a-sfgfp-mphr | 第53页 |
| 3.2.2 融合蛋白sfGFP-MPH的表达 | 第53-55页 |
| 3.3 sfGFP-MPH融合蛋白的表面展示 | 第55-61页 |
| 3.3.1 SF-GFP锚定在细胞表面 | 第55-57页 |
| 3.3.2 融合蛋白展示在细胞表面 | 第57-61页 |
| 3.4 表面固定化酶的活性和稳定性 | 第61-65页 |
| 3.4.1 全细胞催化的最适温度 | 第61-62页 |
| 3.4.2 全细胞催化的最适PH | 第62页 |
| 3.4.3 金属离子对全细胞催化的影响 | 第62-63页 |
| 3.4.4 表面固定化酶的稳定性 | 第63-65页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第65-67页 |
| 4.1 讨论 | 第65-66页 |
| 4.2 展望 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
