| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-15页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 醛酮还原酶超家族 | 第10-13页 |
| 1.2.1 醛酮还原酶超家族简介 | 第10-11页 |
| 1.2.2 醛酮还原酶的分类及命名 | 第11-12页 |
| 1.2.3 醛酮还原酶超家族与人类肿瘤疾病的关系 | 第12-13页 |
| 1.3 本文研究的目的意义 | 第13-15页 |
| 第二章 人醛糖还原酶AKR1B1的表达 | 第15-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第16-20页 |
| 2.1.1 试验菌株 | 第16页 |
| 2.1.2 仪器及药品 | 第16-17页 |
| 2.1.3 试剂配置 | 第17-20页 |
| 2.2 实验内容 | 第20-27页 |
| 2.2.1 AKR1B1-pET-15b表达载体的构建 | 第20-22页 |
| 2.2.2 重组菌株AKR1B1-pET-15b-BL21(DE3)预表达 | 第22-24页 |
| 2.2.3 人醛糖还原酶AKR1B1蛋白表达条件的优化 | 第24页 |
| 2.2.4 人醛糖还原酶AKR1B1蛋白的分离纯化 | 第24-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-31页 |
| 2.3.1 重组质粒AKR1B1-pET-15b的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.2 重组菌株AKR1B1-pET-15b-BL21(DE3)预表达 | 第28-29页 |
| 2.3.3 人醛糖还原酶AKR1B1蛋白表达条件的优化 | 第29-30页 |
| 2.3.4 人醛糖还原酶AKR1B1蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.5 AKR1B1蛋白浓度测定 | 第31页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 结论 | 第32-33页 |
| 第三章 细胞的培养 | 第33-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-35页 |
| 3.1.1 实验细胞 | 第33页 |
| 3.1.2 主要仪器及试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 试剂配置 | 第34-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 贴壁细胞的培养 | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-37页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第37页 |
| 3.5 小结 | 第37-38页 |
| 第四章 AKR1B1蛋白在细胞中蛋白水平的鉴定 | 第38-49页 |
| 4.1 实验材料 | 第38-40页 |
| 4.1.1 实验用细胞及菌株 | 第38页 |
| 4.1.2 实验用动物 | 第38-39页 |
| 4.1.3 实验仪器及试剂 | 第39页 |
| 4.1.4 试验试剂的配制 | 第39-40页 |
| 4.2 实验内容 | 第40-44页 |
| 4.2.1 人醛糖还原酶AKR1B1蛋白鼠多克隆抗体的制备 | 第40-42页 |
| 4.2.2 BCA法定量检测细胞中总蛋白含量 | 第42-44页 |
| 4.2.3 ELISA检测 | 第44页 |
| 4.3 实验结果 | 第44-47页 |
| 4.3.1 AKR1B1蛋白大量表达浓缩后的浓度测定结果 | 第44-45页 |
| 4.3.2 AKR1B1蛋白鼠多克隆体效价 | 第45页 |
| 4.3.3 抗体最佳稀释倍数 | 第45-46页 |
| 4.3.4 BCA法定量检测细胞中总蛋白含量 | 第46页 |
| 4.3.5 两种细胞中目的蛋白的含量测定 | 第46-47页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第47页 |
| 4.5 小结 | 第47-49页 |
| 第五章 人醛糖还原酶AKR1B1在细胞中mRNA水平的鉴定 | 第49-61页 |
| 5.1 实验材料 | 第50-52页 |
| 5.1.1 实验用细胞 | 第50页 |
| 5.1.2 试验仪器及试剂 | 第50-51页 |
| 5.1.3 荧光定量PCR引物 | 第51页 |
| 5.1.4 实验试剂的配制 | 第51-52页 |
| 5.2 实验内容 | 第52-56页 |
| 5.2.1 实验用细胞培养 | 第52页 |
| 5.2.2 细胞中总RNA的提取与鉴定 | 第52-53页 |
| 5.2.3 逆转录合成cDNA并鉴定 | 第53-55页 |
| 5.2.4 实时荧光定量PCR | 第55-56页 |
| 5.3 实验结果 | 第56-59页 |
| 5.3.1 细胞中总RNA提取 | 第56页 |
| 5.3.2 cDNA鉴定结果 | 第56-57页 |
| 5.3.3 实时荧光定量PCR结果 | 第57-59页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第59页 |
| 5.5 小结 | 第59-61页 |
| 结论与展望 | 第61-63页 |
| 一、结论 | 第61-62页 |
| 二、展望 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
