| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 引言 | 第16-22页 |
| 1.1 糖脂代谢病与EpCAM | 第16-19页 |
| 1.1.1 糖脂代谢病 | 第16页 |
| 1.1.2 中医药防治糖脂代谢病研究概要 | 第16-17页 |
| 1.1.3 上皮连接分子EpCAM | 第17页 |
| 1.1.4 EpCAM对糖脂代谢病的调控 | 第17-19页 |
| 1.2 CRISPR-Cas9基因编辑技术的研究进展 | 第19页 |
| 1.3 论文研究意义 | 第19-22页 |
| 第二章 EpCAM基因敲除载体体外构建 | 第22-34页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 实验仪器及材料 | 第22-23页 |
| 2.2.1 实验仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验试剂与药品 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-32页 |
| 2.3.1 Cas9靶位点序列设计与确认 | 第23-24页 |
| 2.3.2 构建Cas9gRNA体外转录载体 | 第24-28页 |
| 2.3.3 制备Cas9gRNA和mRNA | 第28-32页 |
| 2.4 结果分析 | 第32-33页 |
| 2.4.1 Cas9gRNA碱基序列及Cas9mRNA构建 | 第32-33页 |
| 2.5 本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 遗传性状稳定的EpCAM基因敲除小鼠的制作 | 第34-50页 |
| 3.1 前言 | 第34页 |
| 3.2 实验仪器及材料 | 第34-36页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第34-35页 |
| 3.2.2 实验试剂与药品 | 第35-36页 |
| 3.2.3 实验动物 | 第36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-43页 |
| 3.3.1 受精卵电转染注射 | 第36-39页 |
| 3.3.2 体外培养检测及胚胎移植 | 第39-41页 |
| 3.3.3 EpCAM基因敲除F0代小鼠基因型鉴定及合笼传代 | 第41-43页 |
| 3.4 结果分析 | 第43-49页 |
| 3.4.1 受精卵电转发育情况及突变率统计 | 第43-44页 |
| 3.4.2 胚胎移植后F0代小鼠成活率分析 | 第44-47页 |
| 3.4.3 EpCAM基因敲除小鼠F1、F2传代 | 第47-49页 |
| 3.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 第四章 EpCAM基因敲除小鼠的表型分析及形态学组织学分析鉴定 | 第50-68页 |
| 4.1 前言 | 第50-51页 |
| 4.2 实验仪器及材料 | 第51-54页 |
| 4.2.1 主要实验仪器与设备 | 第51-52页 |
| 4.2.2 实验材料与试剂 | 第52-54页 |
| 4.2.3 实验动物 | 第54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-60页 |
| 4.3.1 EpCAM基因敲除小鼠纯合子的获得,体重、形态等观察 | 第54-55页 |
| 4.3.2 EpCAM基因敲除小鼠肠道H&E染色 | 第55页 |
| 4.3.3 EpCAM基因敲除小鼠肠道EpCAMmRNA水平表达量检测 | 第55-57页 |
| 4.3.4 EpCAM基因敲除小鼠肠道EpCAM蛋白定位表达量检测 | 第57-60页 |
| 4.4 结果分析 | 第60-67页 |
| 4.4.1 EpCAM基因敲除小鼠表型检测 | 第60-62页 |
| 4.4.2 EpCAM基因敲除小鼠肠道形态学鉴定 | 第62-63页 |
| 4.4.3 EpCAM基因敲除小鼠肠道EpCAMmRNA水平检测 | 第63页 |
| 4.4.4 EpCAM基因敲除小鼠肠道EpCAM蛋白水平检测 | 第63-67页 |
| 4.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第五章 EpCAM基因敲除小鼠对肠细胞连接分子的影响作用验证 | 第68-76页 |
| 5.1 前言 | 第68页 |
| 5.2 实验仪器及材料 | 第68-69页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第68页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第68-69页 |
| 5.3 实验方法 | 第69-70页 |
| 5.3.1 EpCAM基因敲除小鼠肠道各连接分子Real-timePCR检测 | 第69页 |
| 5.3.2 EpCAM基因敲除小鼠肠道各连接分子免疫组化检测 | 第69-70页 |
| 5.4 结果分析 | 第70-74页 |
| 5.4.1 EpCAM基因敲除小鼠肠道组织各连接分子mRNA水平表达分析 | 第70-72页 |
| 5.4.2 EpCAM基因敲除小鼠肠道组织各连接分子蛋白水平表达分析 | 第72-74页 |
| 5.5 本章小结 | 第74-76页 |
| 第六章 EpCAM基因敲除小鼠对肠细胞分化的影响研究 | 第76-82页 |
| 6.1 前言 | 第76页 |
| 6.2 实验仪器及材料 | 第76-77页 |
| 6.2.1 实验仪器 | 第76页 |
| 6.2.2 实验试剂 | 第76-77页 |
| 6.3 实验方法 | 第77-78页 |
| 6.3.1 EpCAM基因敲除小鼠肠道中肠细胞分化相关基因Real-timePCR检测 | 第77页 |
| 6.3.2 EpCAM基因敲除小鼠肠道肠细胞分化相关蛋白免疫组化检测 | 第77-78页 |
| 6.4 实验结果 | 第78-81页 |
| 6.4.1 EpCAM基因敲除小鼠肠道中肠细胞分化相关基因mRNA水平表达分析 | 第78页 |
| 6.4.2 EpCAM基因敲除小鼠肠道中肠细胞分化相关蛋白水平表达分析 | 第78-81页 |
| 6.5 本章小结 | 第81-82页 |
| 第七章 结论与展望 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 英文缩略表 | 第90-91页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
