| 摘要 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-31页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 植物油脂概述 | 第11-12页 |
| 2 自然界植物油脂的合成积累 | 第12-23页 |
| 2.1 植物油脂的化学组成 | 第13-18页 |
| 2.1.1 脂肪酸分类 | 第13-15页 |
| 2.1.2 ω-7脂肪酸 | 第15-18页 |
| 2.2 植物油脂的生物合成 | 第18-22页 |
| 2.2.1 FAs质体内从头合成 | 第20页 |
| 2.2.1 FAs在内质网上加工与TAGs合成 | 第20-22页 |
| 2.2.3 油体的形成 | 第22页 |
| 2.3 植物油脂合成与糖类、蛋白质代谢之间的关系 | 第22-23页 |
| 3 植物油脂合成积累代谢工程的遗传修饰 | 第23-27页 |
| 3.1 植物种子油脂合成积累的遗传修饰及工程改造 | 第24-26页 |
| 3.1.1 增加油脂合成底物(FAs和甘油骨架)供应量 | 第24页 |
| 3.1.2 超表达催化TAGs合成的相关酶基因 | 第24-25页 |
| 3.1.3 超表达植物油脂合成相关的转录因子 | 第25-26页 |
| 3.1.4 调节不同代谢贮存物质之间的碳流 | 第26页 |
| 3.2 植物ω-7脂肪酸生物合成遗传修饰与工程改造 | 第26-27页 |
| 4 本文研究背景、目的、意义及主要研究内容 | 第27-30页 |
| 本论文的主要研究内容 | 第30-31页 |
| 第二章 组成型超表达VgDGAT1a对烟草营养组织油脂含量的影响 | 第31-45页 |
| 要点 | 第31页 |
| 1 材料与方法 | 第31-37页 |
| 1.1 生物材料及制备 | 第31-32页 |
| 1.1.1 植物材料与菌株 | 第31页 |
| 1.1.2 载体 | 第31页 |
| 1.1.3 PCR反应引物 | 第31-32页 |
| 1.2 实验方法 | 第32-37页 |
| 1.2.1 Vernonia DGAT1a的cDNA克隆 | 第32页 |
| 1.2.2 VgDGAT1a基因烟草叶片中瞬时表达 | 第32-33页 |
| 1.2.3 VgDGAT1a基因植物表达载体构建 | 第33-34页 |
| 1.2.4 烟草遗传转化及转基因植株的再生 | 第34-36页 |
| 1.2.5 转基因烟草植株的分子鉴定 | 第36页 |
| 1.2.6 转基因烟草植株叶片油滴显微观察 | 第36页 |
| 1.2.7 转基因烟草叶片总脂肪酸提取和脂肪酸成分及含量的GC分析 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-43页 |
| 2.1 瞬时表达VgDGAT1a对烟草油脂含量的影响 | 第37-38页 |
| 2.2 转VgDGAT1a基因烟草植株鉴定 | 第38页 |
| 2.3 超表达VgDGAT1a基因对转基因烟草叶片油脂含量及成分的影响 | 第38-41页 |
| 2.4 超表达VgDGAT1a对烟草生长等表型的影响 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 4 结论 | 第44-45页 |
| 第三章 超表达猫爪草MucACP-△9D对烟草营养组织油脂脂肪酸成分的影响 | 第45-57页 |
| 要点 | 第45-46页 |
| 1 材料与方法 | 第46-48页 |
| 1.1 生物材料 | 第46页 |
| 1.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 1.2.1 猫爪草MucACP-△9D植物表达载体构建 | 第46-47页 |
| 1.2.2 烟草遗传转化、转基因植株的再生及分子生物学鉴定 | 第47页 |
| 1.2.3 转基因烟草中MucACP-△9D表达的亚细胞定位 | 第47-48页 |
| 1.2.4 转MucACP-△9D基因植株烟草叶片脂肪酸成分提取及气相色谱分析 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-54页 |
| 2.1 转MucACP-△9D基因烟草植株鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2 转基因烟草叶片MucACP-△9D表达蛋白的亚细胞定位 | 第49-50页 |
| 2.3 转MucACP-△9D基因烟草叶片油脂中脂肪酸成分的分析 | 第50-52页 |
| 2.4 超表达MucACP-△9D对烟草生长等表型的影响 | 第52-54页 |
| 2.5 MucACP-△9D基因超表达的去饱和效应及对饱和脂肪酸的影响 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 第四章 CRISPR/Cas9技术在植物营养组织油脂代谢工程中的应用 | 第57-75页 |
| 要点 | 第57-59页 |
| 1 材料与方法 | 第59-66页 |
| 1.1 生物材料与载体 | 第59-60页 |
| 1.1.1 生物材料 | 第59页 |
| 1.1.2 载体 | 第59-60页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9-AGPase植物表达载体构建 | 第60-63页 |
| 1.2.1 gRNA设计 | 第60页 |
| 1.2.2 gRNA体外活性检测 | 第60-63页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9植物表达载体构建 | 第63页 |
| 1.3 烟草遗传转化及转基因植物的获得 | 第63-64页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9-AGPase植物表达载体转化 | 第63页 |
| 1.3.2 转基因植株的分子鉴定 | 第63-64页 |
| 1.4 烟草叶片碳水化合物、油脂及脂肪酸含量测定 | 第64-66页 |
| 1.4.1 还原性糖、总糖和淀粉含量测定 | 第64-66页 |
| 1.4.2 油脂及脂肪酸含量 | 第66页 |
| 2 实验结果与分析 | 第66-72页 |
| 2.1 gRNA设计及靶点效率体外检测 | 第66-68页 |
| 2.2 转CRISPR/Cas9-AGPase转基因植株鉴定 | 第68-70页 |
| 2.3 敲除AGPase基因对烟草营养组织碳水化合物含量的影响 | 第70-71页 |
| 2.4 敲除AGPase基因对烟草营养组织油脂含量的影响 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-73页 |
| 4 结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| Abstract | 第84-86页 |
| 致谢 | 第88页 |
