| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第1章 文章综述 | 第10-24页 |
| 1.1 矮牵牛概述 | 第10页 |
| 1.2 TCP基因研究进展 | 第10-14页 |
| 1.2.1 TCP基因家族命名,结构及分类 | 第10-11页 |
| 1.2.2 TCP基因在其他植物中的功能 | 第11-14页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9技术 | 第14-24页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9的概述 | 第14-15页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9基因编辑系统的构建方法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9的作用机理 | 第16-17页 |
| 1.3.4 CRISPR/Cas9技术在植物中的应用 | 第17-24页 |
| 第2章 引言 | 第24-26页 |
| 2.1 研究背景及意义 | 第24-25页 |
| 2.2 技术路线 | 第25-26页 |
| 第3章 矮牵牛PhTCP3超量表达和CREST沉默植株的表型变化 | 第26-46页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第26-28页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 3.1.2 菌体 | 第26页 |
| 3.1.3 主要仪器设备与耗材 | 第26页 |
| 3.1.4 主要化学试剂及试剂盒 | 第26-27页 |
| 3.1.5 常用试剂配制 | 第27页 |
| 3.1.6 矮牵牛转化基本培养基 | 第27-28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-34页 |
| 3.2.1 植物材料的处理和种植 | 第28页 |
| 3.2.2 农杆菌GV3101冻融法感受态的制备 | 第28-29页 |
| 3.2.3 电击杯的处理及农杆菌电转化感受态细胞的转化 | 第29页 |
| 3.2.4 农杆菌介导矮牵牛的转化 | 第29-30页 |
| 3.2.5 矮牵牛组织的取材以及其cDNA的获得 | 第30-32页 |
| 3.2.6 矮牵牛TCP3基因和内源表达基因表达荧光定量分析 | 第32-33页 |
| 3.2.7 矮牵牛表型观察材料的取材和转基因植株表型观察 | 第33-34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-43页 |
| 3.3.1 pGMFTCP3转基因植株的获得 | 第34-35页 |
| 3.3.2 外源基因的表达情况 | 第35-36页 |
| 3.3.3 转基因株系表型观察 | 第36-41页 |
| 3.3.4 PhTCP3-SRDX转基因苗有关细胞分裂相关基因荧光定量分析 | 第41-42页 |
| 3.3.5 PhTCP3-SRDX转基因苗有关开花相关基因荧光定量分析 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-46页 |
| 第4章 矮牵牛PhTCP4超量表达和CREST沉默植株的表型变化 | 第46-52页 |
| 4.1 实验材料和试剂 | 第46页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第46页 |
| 4.1.2 主要仪器设备与耗材 | 第46页 |
| 4.1.3 主要化学试剂及试剂盒 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 4.2.1 植物材料的处理和种植 | 第46页 |
| 4.2.2 矮牵牛CDNA的获得 | 第46页 |
| 4.2.3 矮牵牛TCP4基因表达特性的实时荧光定量分析 | 第46-47页 |
| 4.2.4 叶片表皮细胞观察方法 | 第47页 |
| 4.2.5 转基因植株表型观察 | 第47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-50页 |
| 4.3.1 外源基因的表达情况 | 第47-48页 |
| 4.3.2 TCP4-SRDX的转基因苗叶片和表皮细胞的大小分析 | 第48-49页 |
| 4.3.3 TCP4-SRDX的转基因株系的分枝情况 | 第49页 |
| 4.3.4 开花时间 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第5章 矮牵牛PhTCP3和PhTCP4基因的敲除及后代表型观察 | 第52-72页 |
| 5.1 实验材料和试剂 | 第52-53页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第52页 |
| 5.1.2 菌株与载体 | 第52页 |
| 5.1.3 主要仪器设备与耗材 | 第52页 |
| 5.1.4 主要化学试剂及试剂盒 | 第52页 |
| 5.1.5 自配的主要试剂和常用培养基配方 | 第52-53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-59页 |
| 5.2.1 植物材料的处理和种植 | 第53页 |
| 5.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第53页 |
| 5.2.3 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第53页 |
| 5.2.4 胶回收 | 第53-54页 |
| 5.2.5 质粒提取 | 第54-55页 |
| 5.2.6 矮牵牛PhTCP3和PhTCP4基因敲除载体构建 | 第55-57页 |
| 5.2.7 农杆菌GV3101冻融法感受态的制备 | 第57页 |
| 5.2.8 电击杯的处理及农杆菌电转化感受态细胞的转化 | 第57页 |
| 5.2.9 农杆菌介导矮牵牛的转化 | 第57页 |
| 5.2.10 转基因植株的检测 | 第57-58页 |
| 5.2.11 转基因植株表型观察 | 第58-59页 |
| 5.3 结果与分析 | 第59-70页 |
| 5.3.1 矮牵牛TCP3和TCP4基因敲除载体的构建 | 第59-60页 |
| 5.3.2 pGMF634和pGMF635转基因植株的获得与检测 | 第60-64页 |
| 5.3.3 pGMF634和pGMF635转基因植株M1代分离情况 | 第64-67页 |
| 5.3.4 PhTCP3和PhTCP4定点敲除突变体M1代表型观察 | 第67-70页 |
| 5.4 讨论 | 第70-72页 |
| 第6章 总结 | 第72-74页 |
| 6.1 主要结果 | 第72页 |
| 6.2 下一步计划 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 缩略词表 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
