| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-47页 |
| 1 Retromer的研究概述 | 第15-20页 |
| 1.1 Retromer的发现和鉴定 | 第15-16页 |
| 1.2 Retromer复合体的组成和结构特征 | 第16-17页 |
| 1.2.1 分拣连接蛋白亚单位 | 第16页 |
| 1.2.2 受体识别亚单位 | 第16-17页 |
| 1.3 Retromer的生物学功能 | 第17-19页 |
| 1.3.1 酵母中的功能 | 第17-18页 |
| 1.3.2 哺乳动物中的功能 | 第18-19页 |
| 1.3.3 植物中的功能 | 第19页 |
| 1.4 Retromer和自噬的关系 | 第19-20页 |
| 2 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第20-26页 |
| 2.1 稻瘟病概况 | 第20页 |
| 2.2 稻瘟病菌的侵染循环 | 第20-21页 |
| 2.3 稻瘟病菌附着胞的形成 | 第21-24页 |
| 2.3.1 界面硬度和疏水性影响附着胞的形成 | 第22页 |
| 2.3.2 疏水蛋白Mpg1和Mph1调控附着胞的形成 | 第22页 |
| 2.3.3 跨膜蛋白Pth11调控附着胞形成 | 第22页 |
| 2.3.4 信号途径调控附着胞的形成 | 第22-24页 |
| 2.4 稻瘟病菌附着胞膨压的形成 | 第24-25页 |
| 2.4.1 海藻糖代谢 | 第24页 |
| 2.4.2 脂质代谢 | 第24-25页 |
| 2.4.3 糖原代谢 | 第25页 |
| 2.5 稻瘟病菌和自噬的关系 | 第25-26页 |
| 3 禾谷镰刀菌研究概况 | 第26-29页 |
| 3.1 禾谷镰刀菌引起严重的小麦赤霉病 | 第26页 |
| 3.2 禾谷镰刀菌的特征和生活史 | 第26-27页 |
| 3.3 禾谷镰刀菌分子遗传学的研究进展 | 第27-29页 |
| 3.3.1 毒素合成过程中的分子生物学研究 | 第27-28页 |
| 3.3.2 各类组学的研究 | 第28-29页 |
| 4 本研究的目的和所要解决的问题 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-47页 |
| 第二章 Vps35/retromer对稻瘟病菌附着胞介导的侵染起至关重要的作用 | 第47-103页 |
| 1 材料与方法 | 第48-62页 |
| 1.1 供试菌株 | 第48页 |
| 1.2 培养基和培养条件 | 第48-50页 |
| 1.3 致病性鉴定材料 | 第50页 |
| 1.4 质粒载体 | 第50-53页 |
| 1.5 生化试剂 | 第53-54页 |
| 1.6 常规分子操作方法 | 第54页 |
| 1.7 稻瘟病菌DNA、RNA的提取和cDNA的合成 | 第54页 |
| 1.8 基因敲除突变体的获得 | 第54-56页 |
| 1.8.1 敲除载体的构建 | 第54-55页 |
| 1.8.2 稻瘟病菌原生质体制备及转化 | 第55页 |
| 1.8.3 敲除突变体的筛选和验证 | 第55-56页 |
| 1.9 Gene-GFP融合载体的构建及互补转化 | 第56页 |
| 1.10 基因敲除突变体的表型分析 | 第56-60页 |
| 1.10.1 菌落形态和生长速度测定 | 第56页 |
| 1.10.2 稻瘟病菌细胞壁敏感性测定 | 第56-57页 |
| 1.10.3 产孢过程观察量及产量统计 | 第57页 |
| 1.10.4 致病性分析 | 第57页 |
| 1.10.5 孢子萌发及附着胞形成分析 | 第57-58页 |
| 1.10.6 洋葱表皮内侵染结构的观察 | 第58页 |
| 1.10.7 大麦表皮内侵染结构的观察和侵染情况分析 | 第58页 |
| 1.10.8 附着胞膨压的测定 | 第58页 |
| 1.10.9 糖原染色 | 第58-59页 |
| 1.10.10 脂肪粒染色 | 第59页 |
| 1.10.11 孢子的自噬性死亡分析 | 第59页 |
| 1.10.12 自噬体(RFP-ATG8)在附着胞形成过程中的定位分析 | 第59页 |
| 1.10.13 实时荧光定量PCR | 第59-60页 |
| 1.10.14 Western blot检测自噬体的累积 | 第60页 |
| 1.11 MoVps35-GFP和RFP-ATG8的共定位分析 | 第60页 |
| 1.12 Co-IP分析 | 第60页 |
| 1.13 MoVps35的定位观察 | 第60-61页 |
| 1.14 荧光染色及细胞学分析 | 第61页 |
| 1.15 动态电影的制作 | 第61页 |
| 1.16 酵母双杂交分析retromer复合体互作关系 | 第61-62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-94页 |
| 2.1 稻瘟病菌中含有Vps35的同源物 | 第62页 |
| 2.2 MoVPS35基因的敲除及突变体的获得 | 第62-64页 |
| 2.3 MoVPS35基因敲除突变体的表型分析 | 第64-81页 |
| 2.3.1 MoVps35调控菌丝的营养生长 | 第64-66页 |
| 2.3.2 △Movps35突变体对细胞壁抑制剂敏感 | 第66-67页 |
| 2.3.3 MoVps35通过调控分生孢子梗的分化进而调控分生孢子的产量 | 第67-68页 |
| 2.3.4 MoVps35对稻瘟病菌的致病性是必须的 | 第68-69页 |
| 2.3.5 MoVps35调控附着胞介导的侵染 | 第69-71页 |
| 2.3.6 MoVps35参与附着孢膨压的产生 | 第71-73页 |
| 2.3.7 MoVps35调控糖原和脂肪粒的转运和代谢 | 第73-76页 |
| 2.3.9 MoVps35调控孢子的自噬性死亡 | 第76-77页 |
| 2.3.10 MoVps35调控自噬体的形成 | 第77-80页 |
| 2.3.11 MoVps35调控ATGs基因的转录 | 第80-81页 |
| 2.4 MoVps35能够和MoAtg8部分共定位并与剪切修饰后的MoATG互作 | 第81-83页 |
| 2.5 MoVps35以小点状定位于液泡膜 | 第83-85页 |
| 2.6 MoVps35-GFP在液泡上具有分选功能 | 第85-88页 |
| 2.7 MoVps26-MoVps29-MoVps35组成retromer货物选择复合体 | 第88-89页 |
| 2.8 基因敲除MoVPS26和MoVPS29产生△Movps35相似的表型缺陷 | 第89-94页 |
| 3 总结与讨论 | 第94-97页 |
| 参考文献 | 第97-103页 |
| 第三章 retromer介导的转运对禾谷镰刀菌的生长发育及致病性起至关重要的作用 | 第103-142页 |
| 1 材料与方法 | 第105-111页 |
| 1.1 供试菌株 | 第105页 |
| 1.2 培养基和培养条件 | 第105-106页 |
| 1.3 致病性鉴定材料 | 第106页 |
| 1.4 质粒载体 | 第106页 |
| 1.5 生化试剂 | 第106页 |
| 1.6 常规分子操作方法 | 第106-107页 |
| 1.7 禾谷镰刀菌DNA、RNA的提取和cDNA的合成 | 第107页 |
| 1.8 基因敲除突变体的获得 | 第107页 |
| 1.8.1 敲除载体的构建 | 第107页 |
| 1.8.2 禾谷镰刀菌原生质体制备及转化 | 第107页 |
| 1.8.3 敲除突变体的筛选和验证 | 第107页 |
| 1.9 Gene-GFP融合载体的构建及互补转化 | 第107-108页 |
| 1.10 FgVps35的定位观察 | 第108页 |
| 1.11 FgVps35-GFP和FgKex2-mCherry的共定位分析 | 第108页 |
| 1.12 荧光染色及细胞学分析 | 第108-109页 |
| 1.13 动态电影的制作 | 第109页 |
| 1.14 基因敲除突变体的表型分析 | 第109-110页 |
| 1.14.1 菌落形态和生长速度测定 | 第109页 |
| 1.14.2 产孢量统计 | 第109页 |
| 1.14.3 禾谷镰刀菌有性交配 | 第109-110页 |
| 1.14.4 致病性分析 | 第110页 |
| 1.14.5 禾谷镰刀菌DON毒素含量的测定 | 第110页 |
| 1.15 实时荧光定量PCR | 第110-111页 |
| 1.16 Western blot检测FgVps35-GFP的表达 | 第111页 |
| 1.17 酵母双杂交分析retromer复合体互作关系 | 第111页 |
| 2 结果与分析 | 第111-133页 |
| 2.1 FgVPS35的鉴定与进化分析 | 第111-113页 |
| 2.2 FgVps35以小点状定位于细胞质 | 第113-115页 |
| 2.3 FgVps35能够从液泡膜转运至TGN | 第115-116页 |
| 2.4 FgVps35以依赖微管的方式在细胞内转运 | 第116-117页 |
| 2.5 药物阻碍FgVps35的转运导致生长发育缺陷 | 第117-118页 |
| 2.6 FgVps35的功能分析 | 第118-133页 |
| 2.6.1 FgVPS35基因的敲除 | 第118-120页 |
| 2.6.2 FgVps35调控菌丝的生长 | 第120-121页 |
| 2.6.3 FgVps35调控分生孢子的形态和产量 | 第121-122页 |
| 2.6.4 △Fgvps35突变体无法产生子囊和子囊孢子 | 第122-124页 |
| 2.6.5 △Fgvps35突变体致病性减弱 | 第124-126页 |
| 2.6.6 镰刀菌中retromer各个亚基间的互作关系 | 第126-128页 |
| 2.6.7 Retromer复合体各个亚基的生物学功能相似 | 第128-133页 |
| 3 小结和讨论 | 第133-136页 |
| 参考文献 | 第136-142页 |
| 附录1 Retromer在稻瘟病菌研究中使用的引物 | 第142-146页 |
| 附录2 Retromer在禾谷镰刀菌研究中使用的引物 | 第146-149页 |
| 附录3 Vps35同源序列的比对分析 | 第149-155页 |
| 附录4 攻读博士学位期间发表的研究论文 | 第155-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
