| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语索引 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-22页 |
| 1.1 伤寒沙门氏菌的相关研究 | 第17页 |
| 1.2 一氧化氮在人体先天免疫系统中的功能 | 第17-18页 |
| 1.3 一氧化氮对细菌影响的双面性 | 第18页 |
| 1.4 细菌的一氧化氮降解机制简介 | 第18-19页 |
| 1.5 基因敲除技术 | 第19页 |
| 1.6 比较CT值相对定量法 | 第19-20页 |
| 1.7 本文研究背景及其思路 | 第20页 |
| 1.8 本文研究的目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 基因缺失突变菌的构建与鉴定 | 第22-47页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1.1 材料 | 第22-26页 |
| 2.1.2 方法 | 第26-36页 |
| 2.2 结果 | 第36-41页 |
| 2.2.1 同源臂R_(12)、R_(34)、V_(12)、V_(34)、W_(12)、W_(34)的扩增 | 第36-37页 |
| 2.2.2 融合PCR的鉴定 | 第37页 |
| 2.2.3 亚克隆重组菌鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.4 基因敲除载体的鉴定 | 第38-40页 |
| 2.2.5 基因缺失突变菌的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3 讨论 | 第41-45页 |
| 2.3.1 基因敲除载体的构建路线 | 第41页 |
| 2.3.2 引物的设计思路 | 第41-44页 |
| 2.3.3 PCR的扩增思路 | 第44页 |
| 2.3.4 基因敲除策略 | 第44-45页 |
| 2.4 小结 | 第45-47页 |
| 第三章 基因缺失突变菌、norR过表达菌与50973 (Rif~+)的致病性比较 | 第47-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第47-54页 |
| 3.1.1 材料 | 第47-49页 |
| 3.1.2 方法 | 第49-54页 |
| 3.2 结果 | 第54-58页 |
| 3.2.1 目的基因norR的扩增 | 第54-55页 |
| 3.2.2 norR过表达菌50973 (NorR)的菌落PCR鉴定 | 第55页 |
| 3.2.3 表达载体的酶切鉴定 | 第55-56页 |
| 3.2.4 基因缺失突变菌、norR过表达菌与50973 (Rif~+)的生长特性比较 | 第56-57页 |
| 3.2.5 注射细菌后小鼠存活情况 | 第57-58页 |
| 3.2.6 注射细菌后小鼠脾脏细菌计数 | 第58页 |
| 3.3 讨论 | 第58-60页 |
| 3.3.1 引物设计思路 | 第58-59页 |
| 3.3.2 基因缺失突变菌、norR过表达菌与50973 (Rif~+)的生长特性比较 | 第59页 |
| 3.3.3 动物实验材料选择 | 第59页 |
| 3.3.4 细菌计数方法的确定 | 第59页 |
| 3.3.5 基因缺失突变菌、norR过表达菌与50973(Rif~+)的致病性分析 | 第59-60页 |
| 3.4 小结 | 第60-61页 |
| 第四章 基因缺失突变菌、norR过表达菌与50973 (Rif~+)的实时荧光定量PCR检测 | 第61-71页 |
| 4.1 材料与方法 | 第61-66页 |
| 4.1.1 材料 | 第61-63页 |
| 4.1.2 方法 | 第63-66页 |
| 4.2 结果 | 第66-67页 |
| 4.2.1 细菌总RNA的质量鉴定 | 第66页 |
| 4.2.2 qRT-PCR扩增曲线与熔解曲线 | 第66页 |
| 4.2.3 qRT-PCR结果分析 | 第66-67页 |
| 4.3 讨论 | 第67-70页 |
| 4.3.1 实时荧光定量PCR | 第67-68页 |
| 4.3.2 引物设计思路 | 第68页 |
| 4.3.3 基因组DNA的消除 | 第68-69页 |
| 4.3.4 熔解曲线 | 第69页 |
| 4.3.5 内参的选择 | 第69-70页 |
| 4.3.6 norR、norV、norW三个基因之间相互作用关系的分析 | 第70页 |
| 4.4 小结 | 第70-71页 |
| 全文总结 | 第71-73页 |
| 展望 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第79页 |
