| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-32页 |
| 1 稻瘟病研究现状 | 第16-20页 |
| 1.1 稻瘟病的危害 | 第16页 |
| 1.2 病原菌及病害侵染循环 | 第16-18页 |
| 1.3 防治方法 | 第18-20页 |
| 1.3.1 化学防治 | 第18页 |
| 1.3.2 生物防治 | 第18页 |
| 1.3.3 抗性品种的培育 | 第18-20页 |
| 1.3.4 栽培措施的调控 | 第20页 |
| 2 细胞自噬 | 第20-21页 |
| 3 蛋白质降解途径 | 第21-22页 |
| 3.1 泛素化修饰作用 | 第21页 |
| 3.2 泛素蛋白酶体途径 | 第21-22页 |
| 3.3 溶酶体降解途径 | 第22页 |
| 4 内体分拣转运复合体概述 | 第22-29页 |
| 4.1 ESCRT复合体的组成 | 第23-28页 |
| 4.1.1 ESCRT-0亚复合体 | 第23-25页 |
| 4.1.2 ESCRT-Ⅰ亚复合体 | 第25页 |
| 4.1.3 ESCRT-Ⅱ亚复合体 | 第25-26页 |
| 4.1.4 ESCRT-Ⅲ亚复合体 | 第26-28页 |
| 4.2 ESCRT的功能 | 第28-29页 |
| 4.2.1 ESCRT参与自体吞噬 | 第28-29页 |
| 4.2.2 ESCRT参与细胞自噬 | 第29页 |
| 5 潜在药物靶标的筛选 | 第29-30页 |
| 6 本实验的研究意义 | 第30-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-50页 |
| 1 实验材料 | 第32-36页 |
| 1.1 实验菌株 | 第32页 |
| 1.2 实验植物 | 第32页 |
| 1.3 实验培养基 | 第32-36页 |
| 1.3.1 LB培养基(1L) | 第32页 |
| 1.3.2 CM培养基(1L) | 第32-34页 |
| 1.3.3 AIM培养基(1L) | 第34页 |
| 1.3.4 DCM培养基(1L) | 第34-35页 |
| 1.3.5 MM培养基(1L) | 第35页 |
| 1.3.6 OMA培养基(IL) | 第35页 |
| 1.3.7 YPD培养基(1L) | 第35页 |
| 1.3.8 SD-Leu-Trp培养基(1L) | 第35页 |
| 1.3.9 SD-Ade-His-Leu-Trp培养基(1L) | 第35-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-50页 |
| 2.1 PCR反应体系 | 第36-37页 |
| 2.1.1 常规PCR反应体系(20μl) | 第36页 |
| 2.1.2 目的片段扩增PCR反应体系(50Vl) | 第36页 |
| 2.1.3 敲除突变体验证PCR体系(20μl,短片段) | 第36-37页 |
| 2.1.4 敲除突变体验证PCR体系(20μl,长片段) | 第37页 |
| 2.1.5 实时荧光定量PCR (qPCR)体系(20μl) | 第37页 |
| 2.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 2.3 PCR产物回收 | 第38页 |
| 2.4 大肠杆菌质粒提取 | 第38-39页 |
| 2.5 基因组DNA的提取方法 | 第39-40页 |
| 2.5.1 粗提法(大量提取) | 第39-40页 |
| 2.5.2 CTAB法(小量提取) | 第40页 |
| 2.6 基因组RNA的提取方法 | 第40-41页 |
| 2.7 目的基因的敲除过程 | 第41-45页 |
| 2.7.1 敲除载体的构建 | 第41-44页 |
| 2.7.2 农杆菌介导DNA转化过程 | 第44-45页 |
| 2.8 目的基因的回补过程 | 第45-46页 |
| 2.8.1 回补载体的构建 | 第45页 |
| 2.8.2 农杆菌介导DNA转化过程 | 第45-46页 |
| 2.9 酵母双杂交过程 | 第46-47页 |
| 2.10 稻瘟病菌突变体表型分析 | 第47-50页 |
| 2.10.1 稻瘟病菌生长速率及产孢量检测 | 第47页 |
| 2.10.2 稻瘟病菌在MM和OMA培养基上的生长速率检测 | 第47页 |
| 2.10.3 稻瘟病菌分生孢子梗形态观察 | 第47-48页 |
| 2.10.4 稻瘟病菌对SDS、CFW、CR和RB的敏感性检测 | 第48页 |
| 2.10.5 稻瘟病菌侵染植物细胞观察 | 第48页 |
| 2.10.6 稻瘟病菌有性生殖分析 | 第48-49页 |
| 2.10.7 稻瘟病菌致病性分析 | 第49页 |
| 2.10.8 qPCR分析 | 第49-50页 |
| 第三章 结果与分析 | 第50-75页 |
| 1 稻瘟病菌32个敲除突变体的获得及表型分析 | 第50-55页 |
| 1.1 稻瘟病菌32个敲除突变体的获得 | 第50-52页 |
| 1.1.1 敲除载体的构建 | 第50-51页 |
| 1.1.2 敲除突变体的筛选与验证 | 第51-52页 |
| 1.2 稻瘟病菌32个敲除突变体的表型分析 | 第52-55页 |
| 1.2.1 敲除突变体的菌落形态 | 第52-53页 |
| 1.2.2 敲除突变体的致病性 | 第53-55页 |
| 2 稻瘟病菌ESCRT复合体15个基因的功能分析 | 第55-63页 |
| 2.1 ESCRT复合体基因在稻瘟病菌生长发育过程中的基因表达 | 第55-60页 |
| 2.1.1 ESCRT-0基因在稻瘟病菌生长发育过程中的基因表达 | 第56页 |
| 2.1.2 ESCRT-Ⅰ基因在稻瘟病菌生长发育过程中的基因表达 | 第56-57页 |
| 2.1.3 ESCRT-Ⅱ基因在稻瘟病菌生长发育过程中的基因表达 | 第57-58页 |
| 2.1.4 ESCRT-Ⅲ基因在稻瘟病菌生长发育过程中的基因表达 | 第58-59页 |
| 2.1.5 ESCRT辅助成分基因基因在稻瘟病菌生长发育过程中的基因表达 | 第59-60页 |
| 2.2 ESCRT复合体的基因定位 | 第60-61页 |
| 2.3 MoVps20和MoVps32的互作 | 第61-63页 |
| 3 稻瘟病菌ESCRT基因的敲除及△MoVps27、△MoCHMP7和△MoVta1三个突变体的表型分析 | 第63-75页 |
| 3.1 稻瘟病菌内体分拣转运复合体基因的敲除 | 第63-65页 |
| 3.1.1 敲除载体的构建 | 第63页 |
| 3.1.2 敲除突变体的筛选与验证 | 第63-64页 |
| 3.1.3 突变体△MoVps27、△MoCHMP7和△MoVta1的回补 | 第64-65页 |
| 3.2 稻瘟病菌ESCRT基因缺失突变体△MoVps27、△MoCHMP7和AMoVta1的表型分析 | 第65-75页 |
| 3.2.1 △MoVps27、△MoCHMP7和△MoVta1的菌落形态分析 | 第65-66页 |
| 3.2.2 △MoVps27、△MoCHMP7和△MoVta1的分生孢子梗形态观察 | 第66-67页 |
| 3.2.3 △MoVps27和△MoCHMP7的生长和产孢分析 | 第67-69页 |
| 3.2.4 △MoVps27和△MoCHMP7对SDS、CFW、CR、RB的敏感性分析 | 第69-71页 |
| 3.2.5 △MoVps27、△MoCHMP7和△MoVta1的致病性分析 | 第71-72页 |
| 3.2.6 △MoVps27和△MoVta1的交配实验 | 第72-73页 |
| 3.2.7 MoVps27基因的过表达分析 | 第73-75页 |
| 第四章 分析与展望 | 第75-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
