| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-21页 |
| ·聚酮化合物及组合生物合成 | 第10-16页 |
| ·聚酮化合物及聚酮合酶 | 第10-12页 |
| ·聚酮化合物的组合生物合成 | 第12-13页 |
| ·异源生物合成聚酮化合物 | 第13-15页 |
| ·聚酮化合物的研究进展 | 第15-16页 |
| ·TMC的生物活性及研究进展 | 第16-19页 |
| ·TMC的生物活性 | 第16-18页 |
| ·TMC生物合成机制的研究进展 | 第18-19页 |
| ·课题研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 TMC脱羧酶基因异源表达载体的构建 | 第21-41页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·主要实验试剂 | 第21-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22页 |
| ·材料、培养基 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-33页 |
| ·Streptomyces griseochromogenes基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·引物的设计与合成 | 第23页 |
| ·重组基因的构建 | 第23-26页 |
| ·酶切载体和目的基因 | 第26-27页 |
| ·酶切DNA的纯化 | 第27-28页 |
| ·载体与目的基因的连接 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·转化与筛选 | 第29页 |
| ·质粒提取 | 第29-30页 |
| ·质粒的双酶切检测 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·pQE60-tmcD重组质粒的构建 | 第31页 |
| ·重组蛋白表达检测 | 第31-32页 |
| ·测序分析 | 第32-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-40页 |
| ·tmcD基因的PCR结果和T载体构建结果 | 第33-34页 |
| ·pET-tmcC、pET-tmcD、pQE-tmcD和pCWori-tmcD重组质粒构建结果 | 第34-39页 |
| ·阳性重组克隆的筛选 | 第39-40页 |
| ·tmcD1-T和tmcD2-T阳性重组质粒测序结果 | 第40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 3 TMC脱羧酶基因的表达 | 第41-56页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·菌株与质粒 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·pET-tmcC、pET-tmcD、pQE-tmcD和pCWori-tmcD重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44-45页 |
| ·诱导温度对目的蛋白表达的影响 | 第45页 |
| ·IPTG浓度对目的蛋白表达的影响 | 第45页 |
| ·不同大肠杆菌宿主对目的蛋白表达的影响 | 第45页 |
| ·目的蛋白的可溶性表达 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-55页 |
| ·诱导温度对目的蛋白的表达的影响 | 第46-48页 |
| ·IPTG浓度对目的蛋白表达的影响 | 第48-50页 |
| ·不同宿主对tmcC蛋白表达的影响及tmcC蛋白表达分析 | 第50-53页 |
| ·tmcD目的蛋白的可溶性表达 | 第53-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 4 TMC脱羧酶的分离纯化和活性分析 | 第56-65页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·菌株与质粒 | 第56页 |
| ·实验试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-60页 |
| ·目的蛋白的纯化前处理 | 第57页 |
| ·亲和层析柱纯化目的蛋白 | 第57-58页 |
| ·目的蛋白的体外酶活性检测 | 第58页 |
| ·HPLC分析酶活反应结果 | 第58-59页 |
| ·底物特异性分析 | 第59页 |
| ·温度对酶活反应的影响 | 第59页 |
| ·辅酶、金属离子及缓冲液pH对酶活反应的影响 | 第59-60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-64页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第60-62页 |
| ·目的蛋白的体外酶活性分析 | 第62-63页 |
| ·底物特异性分析 | 第63页 |
| ·温度对酶活反应的影响 | 第63页 |
| ·辅酶、金属离子及缓冲液pH对酶活反应的影响 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录A tmcC基因和tmcD基因测序结果 | 第71-73页 |
| 附录B 论文中所用的质粒图谱 | 第73-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
