| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-21页 |
| 1 病原学研究进展 | 第11-13页 |
| 2 流行病学研究进展 | 第13页 |
| 3 疫苗的研究进展 | 第13-16页 |
| 4 弓形虫主要抗原基因 | 第16-19页 |
| 5 本研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 材料与方法 | 第21-36页 |
| 1 材料 | 第21-28页 |
| ·虫体及细胞培养所用材料 | 第21页 |
| ·血清 | 第21页 |
| ·试验动物 | 第21页 |
| ·免疫佐剂 | 第21页 |
| ·试剂盒及其它试剂 | 第21页 |
| ·主要溶液及培养基的配置 | 第21-28页 |
| 2 方法 | 第28-36页 |
| ·Vero细胞及弓形虫的体外培养 | 第28页 |
| ·虫体的收集纯化 | 第28页 |
| ·引物设计与合成 | 第28-29页 |
| ·弓形虫全基因组DNA的提取及目的基因片段的扩增 | 第29页 |
| ·PCR产物回收 | 第29页 |
| ·ROP4基因片段的克隆 | 第29-30页 |
| ·质粒DNA的小量制备(碱性裂解法) | 第30页 |
| ·重组质粒的鉴定及序列分析 | 第30页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·ROP4蛋白的诱导表达及表达产物的可溶性分析 | 第31页 |
| ·表达产物预处理 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE | 第32-33页 |
| ·Western blotting鉴定 | 第33页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·纯化蛋白的浓度测定 | 第34-35页 |
| ·动物免疫前准备 | 第35页 |
| ·动物分组及免疫接种 | 第35页 |
| ·T细胞亚群含量检测 | 第35-36页 |
| 结果 | 第36-49页 |
| 1 弓形虫的体外培养 | 第36-37页 |
| 2 PCR扩增 | 第37页 |
| 3 目的基因的克隆及重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| 4 重组质粒的序列分析 | 第38-40页 |
| 5 重组表达载体的构建及鉴定 | 第40-41页 |
| ·原核表达载体的构建与双酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pET-30a-c(+)/ROP4的测序鉴定 | 第41页 |
| 6 氨基酸序列 | 第41-42页 |
| 7 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第42-43页 |
| 8 融合蛋白WESTERN BLOTTING分析 | 第43页 |
| 9 表达产物的可溶性分析结果 | 第43页 |
| 10 融合蛋白的纯化、WESTERN BLOTTING鉴定及浓度的测定 | 第43-46页 |
| 11 BALB/C小鼠T淋巴细胞亚群含量的测定结果 | 第46-49页 |
| 讨论 | 第49-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60-61页 |
| 附录 | 第61页 |
