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NOX4/ROS与RhoA/ROCK1信号通路对HSC-T6细胞行为学的影响及熊果酸的干预靶点

摘要第3-8页
ABSTRACT第8-13页
中英文缩略词表第17-18页
第1章 引言第18-20页
第2章 材料与方法第20-36页
    2.1 材料第20-22页
        2.1.1 实验细胞第20页
        2.1.2 主要试剂第20-21页
        2.1.3 主要仪器第21-22页
    2.2 研究方法第22-35页
        2.2.1 主要液体配制第22-24页
        2.2.2 HSC-T6细胞的培养第24页
        2.2.3 HSC-T6细胞慢病毒转染实验及稳定株筛选第24-26页
        2.2.4 HSC-T6细胞的加药处理第26页
        2.2.5 细胞总蛋白的提取第26页
        2.2.6 细胞总RNA的提取及cDNA合成第26-28页
        2.2.7 荧光定量PCR第28-29页
        2.2.8 Western blotting检测细胞内蛋白表达第29-31页
        2.2.9 F-actin免疫荧光染色第31页
        2.2.10 细胞内ROS测定第31-32页
        2.2.11 MTS法检测细胞活力第32页
        2.2.12 TUNEL法检测HSC-T6细胞凋亡第32-33页
        2.2.13 细胞划痕实验第33-34页
        2.2.14 Transwell侵袭实验第34页
        2.2.15 免疫共沉淀法(Co IP)检测细胞内蛋白相互结合第34-35页
        2.2.16 Biacore法检测体外纯蛋白间相互作用第35页
    2.3 结果分析与统计学处理第35-36页
第3章 实验结果第36-48页
    3.1 基于慢病毒转染技术的稳定细胞株构建及鉴定第36-39页
        3.1.1 NOX4干扰(NOX4i)慢病毒转染及鉴定第36-37页
        3.1.2 RhoA干扰(RhoAi)慢病毒转染及鉴定第37-38页
        3.1.3 NOX4过表达(NOX4OE)慢病毒转染及鉴定第38-39页
    3.2 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞增殖、凋亡的影响第39-40页
        3.2.1 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞增殖的影响第39页
        3.2.2 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞凋亡的影响第39-40页
    3.3 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞迁移、侵袭的影响第40-42页
        3.3.1 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞迁移的影响第40-41页
        3.3.2 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞侵袭实验的影响第41-42页
    3.4 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞内ROS水平的影响第42-43页
    3.5 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞细胞骨架F-actin的影响第43-44页
    3.6 UA干预对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞NOX4/ROS及RhoA/ROCK1信号通路相关基因m RNA表达的影响第44-45页
    3.7 UA干预对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞NOX4/ROS及RhoA/ROCK1信号通路相关蛋白表达的影响第45-46页
    3.8 NOX4与Rho A蛋白间相互作用第46-48页
        3.8.1 NOX4OE稳定细胞株内NOX4及Rho A免疫共沉淀(Co IP)第46页
        3.8.2 体外全长NOX4与Rho A纯蛋白Biacore蛋白互作分析第46-48页
第4章 讨论第48-53页
    4.1 NOX4/ROS信号通路对HSC行为学及相关蛋白表达的影响第48-49页
    4.2 RhoA/ROCK1信号通路对HSC行为学影响及相关蛋白表达的影响第49-50页
    4.3 NOX4/ROS与RhoA/ROCK1信号通路相互调控的作用机制第50-51页
    4.4 熊果酸(UA)抗纤维化机制及相关分子靶点第51页
    4.5 实验存在的问题与不足第51-53页
第5章 结论与展望第53-54页
    5.1 结论第53页
    5.2 展望第53-54页
致谢第54-55页
参考文献第55-59页
攻读学位期间研究成果第59-60页
综述第60-71页
    参考文献第67-71页

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