摘要 | 第3-8页 |
ABSTRACT | 第8-13页 |
中英文缩略词表 | 第17-18页 |
第1章 引言 | 第18-20页 |
第2章 材料与方法 | 第20-36页 |
2.1 材料 | 第20-22页 |
2.1.1 实验细胞 | 第20页 |
2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
2.2 研究方法 | 第22-35页 |
2.2.1 主要液体配制 | 第22-24页 |
2.2.2 HSC-T6细胞的培养 | 第24页 |
2.2.3 HSC-T6细胞慢病毒转染实验及稳定株筛选 | 第24-26页 |
2.2.4 HSC-T6细胞的加药处理 | 第26页 |
2.2.5 细胞总蛋白的提取 | 第26页 |
2.2.6 细胞总RNA的提取及cDNA合成 | 第26-28页 |
2.2.7 荧光定量PCR | 第28-29页 |
2.2.8 Western blotting检测细胞内蛋白表达 | 第29-31页 |
2.2.9 F-actin免疫荧光染色 | 第31页 |
2.2.10 细胞内ROS测定 | 第31-32页 |
2.2.11 MTS法检测细胞活力 | 第32页 |
2.2.12 TUNEL法检测HSC-T6细胞凋亡 | 第32-33页 |
2.2.13 细胞划痕实验 | 第33-34页 |
2.2.14 Transwell侵袭实验 | 第34页 |
2.2.15 免疫共沉淀法(Co IP)检测细胞内蛋白相互结合 | 第34-35页 |
2.2.16 Biacore法检测体外纯蛋白间相互作用 | 第35页 |
2.3 结果分析与统计学处理 | 第35-36页 |
第3章 实验结果 | 第36-48页 |
3.1 基于慢病毒转染技术的稳定细胞株构建及鉴定 | 第36-39页 |
3.1.1 NOX4干扰(NOX4i)慢病毒转染及鉴定 | 第36-37页 |
3.1.2 RhoA干扰(RhoAi)慢病毒转染及鉴定 | 第37-38页 |
3.1.3 NOX4过表达(NOX4OE)慢病毒转染及鉴定 | 第38-39页 |
3.2 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞增殖、凋亡的影响 | 第39-40页 |
3.2.1 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞增殖的影响 | 第39页 |
3.2.2 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞凋亡的影响 | 第39-40页 |
3.3 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞迁移、侵袭的影响 | 第40-42页 |
3.3.1 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞迁移的影响 | 第40-41页 |
3.3.2 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞侵袭实验的影响 | 第41-42页 |
3.4 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞内ROS水平的影响 | 第42-43页 |
3.5 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞细胞骨架F-actin的影响 | 第43-44页 |
3.6 UA干预对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞NOX4/ROS及RhoA/ROCK1信号通路相关基因m RNA表达的影响 | 第44-45页 |
3.7 UA干预对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞NOX4/ROS及RhoA/ROCK1信号通路相关蛋白表达的影响 | 第45-46页 |
3.8 NOX4与Rho A蛋白间相互作用 | 第46-48页 |
3.8.1 NOX4OE稳定细胞株内NOX4及Rho A免疫共沉淀(Co IP) | 第46页 |
3.8.2 体外全长NOX4与Rho A纯蛋白Biacore蛋白互作分析 | 第46-48页 |
第4章 讨论 | 第48-53页 |
4.1 NOX4/ROS信号通路对HSC行为学及相关蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
4.2 RhoA/ROCK1信号通路对HSC行为学影响及相关蛋白表达的影响 | 第49-50页 |
4.3 NOX4/ROS与RhoA/ROCK1信号通路相互调控的作用机制 | 第50-51页 |
4.4 熊果酸(UA)抗纤维化机制及相关分子靶点 | 第51页 |
4.5 实验存在的问题与不足 | 第51-53页 |
第5章 结论与展望 | 第53-54页 |
5.1 结论 | 第53页 |
5.2 展望 | 第53-54页 |
致谢 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-59页 |
攻读学位期间研究成果 | 第59-60页 |
综述 | 第60-71页 |
参考文献 | 第67-71页 |