| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 CRISPR/Cas系统概述 | 第13-19页 |
| 1.1.1 CRISPR/Cas系统的发现 | 第13页 |
| 1.1.2 CRISPR/Cas系统的组成 | 第13-14页 |
| 1.1.3 CRISPR/Cas系统的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.4 CRISPR/Cas9系统的作用机制 | 第15页 |
| 1.1.5 CRISPR/Cas9系统的应用 | 第15-17页 |
| 1.1.6 CRISPR/Cas9系统的局限性 | 第17-19页 |
| 1.2 三方激活因子VP64-p65-Rta(VPR)简介 | 第19-20页 |
| 1.3 CRISPR/Cpf1系统概述 | 第20-24页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cpf1系统简介 | 第20-21页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cpf1的作用机制 | 第21-23页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cpf1系统的应用 | 第23-24页 |
| 1.4 模式生物——酿酒酵母 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第25-26页 |
| 第2章 目的基因的表达及表达量对CRISPR/Cas9系统编辑效率的影响 | 第26-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-31页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.2 培养基 | 第27-28页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.4 实验主要仪器 | 第29页 |
| 2.1.5 引物名称及序列 | 第29-31页 |
| 2.2 技术路线 | 第31页 |
| 2.2.1 目的基因表达对CRISPR/Cas9编辑系统效率的影响 | 第31页 |
| 2.2.2 目的基因表达量对CRISPR/Cas9编辑系统效率的影响 | 第31页 |
| 2.3 质粒上目的基因表达对编辑效率的影响 | 第31-37页 |
| 2.3.1 表达质粒的构建 | 第31-35页 |
| 2.3.2 编辑质粒的构建 | 第35-36页 |
| 2.3.3 重组质粒共转化 | 第36-37页 |
| 2.3.4 转化子的筛选及检测 | 第37页 |
| 2.4 目的基因在染色体上表达与否对编辑效率的影响 | 第37-41页 |
| 2.4.1 不表达目的基因的酿酒酵母的获得 | 第37-40页 |
| 2.4.2 编辑质粒的构建 | 第40-41页 |
| 2.4.3 CRISPR/Cas9系统对目的基因进行编辑 | 第41页 |
| 2.4.4 转化子的筛选及检测 | 第41页 |
| 2.5 目的基因表达量对CRISPR/Cas9编辑系统效率的影响 | 第41-47页 |
| 2.5.1 gRNA组件的合成 | 第41-42页 |
| 2.5.2 重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| 2.5.3 培养条件的确定 | 第43-44页 |
| 2.5.4 重组质粒对目的基因进行编辑 | 第44-45页 |
| 2.5.5 RT-qPCR | 第45-47页 |
| 2.6 实验结果及分析 | 第47-60页 |
| 2.6.1 目的基因在质粒上表达与否对效率的影响 | 第47-51页 |
| 2.6.2 目的基因在染色体上表达与否对效率的影响 | 第51-55页 |
| 2.6.3 重组质粒的正确构建 | 第55-57页 |
| 2.6.4 转化子目的基因突变情况 | 第57-58页 |
| 2.6.5 RT-qPCR结果 | 第58-60页 |
| 2.7 本章小结 | 第60-62页 |
| 第3章 三方激活因子对CRISPR/Cas9系统编辑效率影响的验证 | 第62-67页 |
| 3.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第62页 |
| 3.1.2 培养基 | 第62页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第62页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第62页 |
| 3.1.5 引物名称及序列 | 第62-63页 |
| 3.2 实验方法 | 第63-64页 |
| 3.2.1 pCRCTG418-VPR质粒的构建 | 第63页 |
| 3.2.2 重组质粒转化 | 第63-64页 |
| 3.2.3 质粒提取 | 第64页 |
| 3.2.4 质粒与gRNA连接 | 第64页 |
| 3.2.5 两种质粒转化酵母细胞 | 第64页 |
| 3.2.6 转化子的筛选及检测 | 第64页 |
| 3.3 实验结果及分析 | 第64-66页 |
| 3.3.1 转化子的筛选及检测 | 第64-66页 |
| 3.4 本章小结 | 第66-67页 |
| 第4章 CRISPR/Cpf1基因编辑系统技术方案的建立 | 第67-73页 |
| 4.1 实验材料 | 第67-68页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第67页 |
| 4.1.2 培养基 | 第67页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第67页 |
| 4.1.4 实验主要仪器 | 第67页 |
| 4.1.5 引物名称及序列 | 第67-68页 |
| 4.2 实验方法 | 第68-70页 |
| 4.2.1 CRISPR/Cpf1系统质粒的构建 | 第68-69页 |
| 4.2.2 两种质粒与gRNA连接 | 第69-70页 |
| 4.2.3 两种系统对目的基因进行编辑 | 第70页 |
| 4.2.4 转化子的筛选及检测 | 第70页 |
| 4.3 实验结果及分析 | 第70-72页 |
| 4.4 本章小结 | 第72-73页 |
| 第5章 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第81页 |
