中文摘要 | 第3-5页 |
英文摘要 | 第5-6页 |
缩略词表 | 第10-12页 |
1 绪论 | 第12-24页 |
1.1 引言 | 第12-13页 |
1.2 维管束的发育 | 第13页 |
1.3 植物叶片的研究 | 第13-14页 |
1.3.1 叶片的形态 | 第13-14页 |
1.3.2 叶片的发育 | 第14页 |
1.3.3 叶脉的形态 | 第14页 |
1.3.4 水稻叶脉的特点 | 第14页 |
1.4 水稻叶脉发育的分子机制 | 第14-18页 |
1.5 课题所用的研究方法 | 第18-21页 |
1.5.1 数字基因表达谱(DGE) | 第18页 |
1.5.2 相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ) | 第18-21页 |
1.6 课题研究的目的及意义 | 第21-22页 |
1.7 课题研究内容 | 第22页 |
1.8 课题创新之处 | 第22-24页 |
2 dl2 突变体的DGE分析 | 第24-36页 |
2.1 实验材料与试剂 | 第24页 |
2.1.1 植物材料和及生长环境 | 第24页 |
2.1.2 工具酶及主要生化试剂 | 第24页 |
2.1.3 提取RNA所需试剂配制 | 第24页 |
2.2 主要仪器设备 | 第24-25页 |
2.3 实验方法 | 第25-30页 |
2.3.1 Trizol法提水稻总RNA及反转录 | 第25-27页 |
2.3.2 构建文库和测序 | 第27页 |
2.3.3 数字基因表达谱分析流程 | 第27-28页 |
2.3.4 荧光定量RT-PCR验证差异表达基因 | 第28-30页 |
2.4 结果与分析 | 第30-35页 |
2.4.1 DGE文库与差异表达mRNA的分析结果 | 第30-32页 |
2.4.2 差异表达基因筛选结果 | 第32-33页 |
2.4.3 差异表达基因的富集分析 | 第33-34页 |
2.4.4 差异表达基因的qRT-PCR荧光定量验证结果 | 第34-35页 |
2.5 讨论 | 第35-36页 |
2.5.1 测序质量评估 | 第35页 |
2.5.2 差异基因的筛选、验证和分析 | 第35-36页 |
3 dl2 突变体差异表达蛋白的iTRAQ分析 | 第36-48页 |
3.1 实验材料与试剂 | 第36-37页 |
3.1.1 植物材料 | 第36页 |
3.1.2 工具酶及主要生化试剂 | 第36-37页 |
3.1.3 主要生化试剂的配制 | 第37页 |
3.2 主要仪器设备 | 第37-38页 |
3.3 实验方法 | 第38-41页 |
3.3.1 蛋白质的提取 | 第38-39页 |
3.3.2 蛋白质浓度测量(Bradford定量) | 第39页 |
3.3.3 SDS电泳 | 第39页 |
3.3.4 蛋白质酶解 | 第39页 |
3.3.5 iTRAQ标记 | 第39-40页 |
3.3.6 SCX分离 | 第40页 |
3.3.7 LC-ESI-MSMS质谱分析 | 第40-41页 |
3.3.8 生物信息分析 | 第41页 |
3.3.9 差异蛋白的生物学分析 | 第41页 |
3.4 结果与分析 | 第41-46页 |
3.4.1 质谱检测结果 | 第41-43页 |
3.4.2 差异蛋白的筛选结果 | 第43-45页 |
3.4.3 GO注释 | 第45页 |
3.4.4 pathway代谢通路注释 | 第45页 |
3.4.5 差异蛋白的GO富集分析 | 第45-46页 |
3.4.6 差异蛋白的Pathway富集分析 | 第46页 |
3.4.7 与叶脉发育相关的差异表达蛋白 | 第46页 |
3.5 讨论 | 第46-48页 |
3.5.1 差异表达蛋白的筛选与分析 | 第46-47页 |
3.5.2 与dl2 披垂表现特征相关的差异表达蛋白 | 第47-48页 |
4. dl2 突变体转录组与蛋白组的相关性 | 第48-52页 |
4.1 转录组与蛋白组相关性分析的意义 | 第48页 |
4.2 差异表达mRNA与差异表达蛋白的比较 | 第48-50页 |
4.3 讨论 | 第50-52页 |
5 dl2 突变表型相关基因的超表达载体的构建及遗传转化 | 第52-74页 |
5.1 实验材料与试剂 | 第52-59页 |
5.1.1 实验材料 | 第52页 |
5.1.2 克隆及载体 | 第52页 |
5.1.3 工具酶及主要生化试剂 | 第52-53页 |
5.1.4 培养基及储存液配方 | 第53-59页 |
5.2 主要仪器设备 | 第59-60页 |
5.3 实验方法 | 第60-68页 |
5.3.1 超表达载体的构建 | 第60-65页 |
5.3.2 超表达重组子遗传转化农杆菌感受态细胞EHA105 | 第65-66页 |
5.3.3 农杆菌介导的愈伤浸染法转化水稻 | 第66-68页 |
5.3.5 阳性苗的检测 | 第68页 |
5.3.6 炼苗及移栽 | 第68页 |
5.4 转基因植株的QRT-PCR鉴定 | 第68-69页 |
5.4.1 引物设计 | 第68-69页 |
5.4.2 Trizol法提取转基因植株总RNA及反转录 | 第69页 |
5.5 结果与分析 | 第69-71页 |
5.5.1 超表达载体的构建 | 第69-70页 |
5.5.2 超表达转基因苗的获得及培养 | 第70页 |
5.5.3 转基因植株中DL基因的表达情况 | 第70-71页 |
5.6 讨论 | 第71-74页 |
6 主要结果、后续工作及展望 | 第74-78页 |
6.1 主要结果 | 第74-75页 |
6.2 后续工作及展望 | 第75-78页 |
致谢 | 第78-80页 |
参考文献 | 第80-90页 |
附录 | 第90-92页 |
A作者攻读硕士期间发表的论文目录: | 第90页 |
B作者攻读硕士学位期间参与的科研项目: | 第90-92页 |
附表一 | 第92-96页 |
附表二 | 第96-102页 |
附表三 | 第102-103页 |