| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第9-21页 |
| 1.1 基因组编辑 | 第9-16页 |
| 1.1.1 锌指核酸酶介导的基因组编辑技术 | 第10-11页 |
| 1.1.2 转录激活因子类似效应因子核酸酶(TALEN)介导的基因组编辑 | 第11-13页 |
| 1.1.3 CRISPR/Cas 系统 | 第13-16页 |
| 1.2 检测基因打靶效率的方法 | 第16-19页 |
| 1.2.1 改良的 AFLP 技术 | 第16-17页 |
| 1.2.2 Surveyor 突变检测 | 第17页 |
| 1.2.3 高分辨率熔解曲线法检测突变 | 第17-19页 |
| 1.3 定位打靶基因的功能简介 | 第19页 |
| 1.4 细胞重编程与胚胎干细胞 | 第19-20页 |
| 1.5 研究的主要内容及意义 | 第20-21页 |
| 2.实验材料和方法 | 第21-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1 实验细胞系 | 第21页 |
| 2.1.2 实验主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 实验用载体及基因片段 | 第23页 |
| 2.1.5 实验用引物序列 | 第23-24页 |
| 2.1.6 实验用缓冲液的配制 | 第24-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-39页 |
| 2.2.1 打靶载体的制备 | 第26-30页 |
| 2.2.2 hgRNA 的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.3 小鼠成纤维细胞的获得及传代 | 第31-32页 |
| 2.2.4 小鼠成纤维细胞的冻存及复苏 | 第32-33页 |
| 2.2.5 人 293T 细胞的培养 | 第33-34页 |
| 2.2.6 目的片段的 293T 细胞脂质体转染 | 第34页 |
| 2.2.7 人 293T 细胞基因组提取(Omiga 试剂盒) | 第34-35页 |
| 2.2.8 打靶效率检测 | 第35-37页 |
| 2.2.9 打靶载体阳性对照的筛选 | 第37-39页 |
| 3 结果 | 第39-51页 |
| 3.1 载体构建的结果 | 第39-41页 |
| 3.1.1 目的基因片段扩增结果 | 第39页 |
| 3.1.2 gRNA 的构建结果 | 第39-41页 |
| 3.2 细胞培养结果 | 第41-43页 |
| 3.2.1 人 293T 细胞培养结果 | 第41-42页 |
| 3.2.2 转染后细胞状态结果图 | 第42页 |
| 3.2.3 转染细胞后 3 天状态图 | 第42-43页 |
| 3.3 CRISPR/Cas 系统效率的检测结果 | 第43-51页 |
| 3.3.1 IL2RG＆EMX1 基因序列比对结果图 | 第43-45页 |
| 3.3.2 AFLP 检测结果图 | 第45-46页 |
| 3.3.3 Surveyor 检测结果图 | 第46-48页 |
| 3.3.4 HRM 曲线图 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 关于 CRISPR/Cas 打靶技术 | 第51页 |
| 4.2 关于 Cas9 打靶效率的检测结果 | 第51-52页 |
| 4.3 关于 gRNA 的构建方法 | 第52-55页 |
| 5 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
