| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 单增李斯特菌简介 | 第10-12页 |
| 1.1.1 单增李斯特菌概述 | 第10页 |
| 1.1.2 单增李斯特菌的致病机理 | 第10-12页 |
| 1.2 单增李斯特菌噬菌体研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2.1 噬菌体基本特性 | 第12页 |
| 1.2.2 噬菌体分类 | 第12-14页 |
| 1.2.3 李斯特菌噬菌体研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.4 李斯特菌噬菌体应用于食品加工业 | 第16页 |
| 1.3 噬菌体裂解酶简介 | 第16-18页 |
| 1.3.1 裂解酶结构 | 第16-17页 |
| 1.3.2 影响裂解酶裂解效果的几个因素 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 单增李斯特菌溶源性噬菌体的诱导分离与基因组测序 | 第19-32页 |
| 2.1 材料和方法 | 第19-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.2 单增李斯特菌 tRNAArg位点原噬菌体检测 | 第20页 |
| 2.1.3 噬菌体诱导 | 第20-21页 |
| 2.1.4 单增李斯特菌噬菌体电镜观察 | 第21页 |
| 2.1.5 噬菌体基因组 DNA 制备 | 第21-22页 |
| 2.1.6 噬菌体核酸类型鉴定 | 第22页 |
| 2.1.7 鸟枪法测定单增李斯特菌噬菌体基因组序列 | 第22页 |
| 2.1.8 基因组序列分析 | 第22-23页 |
| 2.2 实验结果 | 第23-31页 |
| 2.2.1 tRNAArg位点的原噬菌体检测 | 第23-24页 |
| 2.2.2 噬菌体电镜观察 | 第24-25页 |
| 2.2.3 噬菌体核酸类型鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.4 噬菌体基因组的序列测定与分析 | 第26-31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 单增李斯特菌噬菌体 W001 裂解酶裂解活性研究 | 第32-48页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-41页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第32页 |
| 3.1.2 噬菌体 W001 裂解酶表达载体构建 | 第32-34页 |
| 3.1.3 裂解酶 PLYW001 诱导表达 | 第34-36页 |
| 3.1.4 PLYW001 裂菌实验 | 第36-38页 |
| 3.1.5 噬菌体裂解酶 PLYW001 裂菌谱 | 第38页 |
| 3.1.6 裂解酶催化结构域关键氨基酸替代突变 | 第38-41页 |
| 3.2 实验结果 | 第41-46页 |
| 3.2.1 噬菌体 PLYW001 生物信息学分析 | 第41-42页 |
| 3.2.2 噬菌体 W001 裂解酶基因扩增 | 第42页 |
| 3.2.3 pET28a- plyW001 表达载体构建 | 第42-43页 |
| 3.2.4 裂解酶 PLYW001 蛋白诱导表达 | 第43-44页 |
| 3.2.5 裂解酶裂菌活性 | 第44-45页 |
| 3.2.6 裂解酶关键氨基酸鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 噬菌体 W001 裂解酶 CBD 结合功能研究 | 第48-56页 |
| 4.1 材料与方法 | 第48-53页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第48-49页 |
| 4.1.2 引物设计与合成 | 第49页 |
| 4.1.3 PCR 扩增 | 第49-50页 |
| 4.1.4 pET28a-EGFP-CBD 的构建及鉴定 | 第50-52页 |
| 4.1.5 EGFP-CBD 的表达和纯化 | 第52-53页 |
| 4.1.6 噬菌体裂解酶 CBD 结合实验 | 第53页 |
| 4.2 实验结果 | 第53-55页 |
| 4.2.1 pET28a-EGFP-CBD 构建 | 第53-54页 |
| 4.2.2 EGFP-CBD 融合蛋白诱导表达 | 第54页 |
| 4.2.3 激光共聚焦显微镜观察 EGFP-CBD 结合实验 | 第54-55页 |
| 4.3 讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 单增李斯特菌整合质粒构建 | 第56-63页 |
| 5.1 材料与方法 | 第56-59页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 5.1.2 pHAL2 构建 | 第57-58页 |
| 5.1.3 pHAL2 电转化 LM1003 | 第58-59页 |
| 5.2 实验结果 | 第59-62页 |
| 5.2.1 pHAL2 构建 | 第59-60页 |
| 5.2.2 pHAL2 转化 E.Coli SM10 和 E.Coli XL-10 | 第60页 |
| 5.2.3 pHAL2 电转化 LM1003 | 第60-62页 |
| 5.3 讨论 | 第62-63页 |
| 第六章 全文总结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第75-78页 |
| 附件 | 第78页 |
