| 目录 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-19页 |
| 1 多重PCR的发展历程 | 第8页 |
| 2 马铃薯病毒病 | 第8-9页 |
| 2.1 花叶型 | 第9页 |
| 2.2 卷叶型 | 第9页 |
| 2.3 束顶型 | 第9页 |
| 3 我国主要的马铃薯病毒病 | 第9-12页 |
| 3.1 马铃薯X病毒 | 第9-10页 |
| 3.2 马铃薯Y病毒 | 第10页 |
| 3.3 马铃薯A病毒 | 第10页 |
| 3.4 马铃薯S病毒 | 第10-11页 |
| 3.5 马铃薯纺缍块茎类病毒 | 第11页 |
| 3.6 烟草环斑病毒 | 第11页 |
| 3.7 烟草花叶病毒 | 第11页 |
| 3.8 黄瓜花叶病毒 | 第11-12页 |
| 4 检测的方法 | 第12-16页 |
| 4.1 生物学检测法 | 第12页 |
| 4.2 清学检测法 | 第12-13页 |
| 4.3 电子显微镜检测法 | 第13页 |
| 4.4 分子生物学检测方法 | 第13-16页 |
| 4.4.1 多重PCR生物芯片技术 | 第13页 |
| 4.4.2 AFLP多重PCR | 第13-14页 |
| 4.4.3 多重RT-PCR | 第14页 |
| 4.4.4 实时荧光多重PCR技术 | 第14页 |
| 4.4.5 巢式多重PCR | 第14页 |
| 4.4.6 GeXP技术 | 第14-16页 |
| 5 多重PCR的影响因素 | 第16-17页 |
| 5.1 反应体系对多重PCR的影响 | 第16-17页 |
| 5.2 反应条件对多重PCR的影响 | 第17页 |
| 6 研究目的及意义 | 第17页 |
| 7 多重PCR在检测方面的积极影响 | 第17-19页 |
| 材料与方法 | 第19-29页 |
| 1 试验材料 | 第19-20页 |
| 1.1 植物材料 | 第19页 |
| 1.2 材料来源 | 第19页 |
| 1.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 1.3.1 试剂盒 | 第19-20页 |
| 1.3.2 分子生物学试剂 | 第20页 |
| 1.3.3 主要仪器耗材 | 第20页 |
| 2 试验方法 | 第20-29页 |
| 2.1 引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2 植物基因的提取 | 第21-22页 |
| 2.3 反转录 | 第22页 |
| 2.4 缓冲液及培养基配置 | 第22页 |
| 2.5 培养基 | 第22-23页 |
| 2.6 感受态细胞制备 | 第23页 |
| 2.7 引物特异性验证 | 第23-24页 |
| 2.8 构建单克隆载体 | 第24页 |
| 2.9 PCR扩增产物纯化回收 | 第24页 |
| 2.10 DNA链接反应 | 第24页 |
| 2.11 DNA转化实验 | 第24-25页 |
| 2.12 单引物RT-PCR特异性验证将特异引物浓度 | 第25页 |
| 2.13 多重检测体系特异性验证 | 第25页 |
| 2.14 克隆质粒优化PCR反应与体系的调节 | 第25-26页 |
| 2.15 GeXP上样 | 第26页 |
| 2.16 体外转录质粒的线性化 | 第26页 |
| 2.17 体外转录RNA的制备 | 第26-27页 |
| 2.18 体外转录后去DNA及盐类等 | 第27-28页 |
| 2.19 多重体系单引物单模板灵敏度测试 | 第28页 |
| 2.20 多重体系多引物多模板灵敏度测试 | 第28页 |
| 2.21 多重检测体系的应用 | 第28-29页 |
| 结果与分析 | 第29-40页 |
| 1 引物的特异性验证结果 | 第29-31页 |
| 2 梯度PCR | 第31页 |
| 3 单重PCR引物验证结果 | 第31-33页 |
| 4 混合引物浓度配比 | 第33-35页 |
| 5 多重检测体系单模板灵敏度试验结果 | 第35-38页 |
| 6 多重检测体系混合模板灵敏度试验结果 | 第38-39页 |
| 7 样本应用的结果 | 第39-40页 |
| 讨论 | 第40-42页 |
| 结论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| Abstract | 第50页 |
| 附录一 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54页 |