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低磷诱导拟南芥根际酸化缺失突变体p444基因克隆及功能分析

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
目录第9-12页
缩写词第12-13页
1 前言第13-25页
    1.1 磷的生物学作用第13页
        1.1.1 磷是植物体内许多代谢过程的关键元素第13页
        1.1.2 磷是植物体内许多关键分子的重要组份第13页
        1.1.3 磷参与植物体的抗逆性反应第13页
    1.2 磷在土壤中的存在状态第13-14页
    1.3 植物对磷的吸收方式第14页
    1.4 植物对磷缺乏环境的适应机制第14-18页
        1.4.1 形态适应性第15-17页
        1.4.2 生理生化适应性第17-18页
    1.5 低磷信号转导网络第18-22页
        1.5.1 磷的吸收调控第19页
        1.5.2 糖信号介导的调控途径第19-20页
        1.5.3 MicroRNA 调控第20-21页
        1.5.4 包含有 SPX 结构域的蛋白调控第21-22页
    1.6 氮与磷的关系第22-23页
    1.7 立题依据第23-25页
2 材料与方法第25-43页
    2.1 实验仪器第25页
    2.2 实验材料第25-26页
        2.2.1 植物材料第25-26页
        2.2.2 质粒载体与菌株第26页
    2.3 实验试剂第26页
    2.4 引物合成及 DNA 测序第26页
    2.5 常用培养基及溶液的配制第26-28页
        2.5.1 培养基的配制第26-27页
        2.5.2 常用溶液的配制第27-28页
    2.6 实验方法第28-43页
        2.6.1 拟南芥种植第28-29页
        2.6.2 原位溴甲酚紫 pH 指示剂显色法第29页
        2.6.3 酸化定量测定方法第29页
        2.6.4 拟南芥无机磷含量测定方法第29-30页
        2.6.5 花青素含量的测定第30页
        2.6.6 拟南芥侧根密度的统计第30页
        2.6.7 拟南芥叶绿素含量测定方法第30-31页
        2.6.8 拟南芥叶绿素荧光测定第31页
        2.6.9 拟南芥基因组 DNA 提取方法第31页
        2.6.10 拟南芥人工杂交技术第31-32页
        2.6.11 图位克隆技术第32-37页
        2.6.12 GUS 载体制备和拟南芥花序浸染第37-43页
3 结果与分析第43-61页
    3.1 根际酸化缺失突变体 p444 的筛选第43页
    3.2 p444 低磷胁迫下根际酸化弱于 WT第43-45页
    3.3 质膜 H~+-ATPase 可能介导低磷诱导的 p444 根际酸化过程第45-46页
    3.4 p444 在低磷胁迫下叶绿素含量少于 WT第46-47页
    3.5 p444 在低磷胁迫下 PSⅡ光合速率弱于 WT第47-48页
    3.6 p444 磷转运能力强于 WT第48-49页
    3.7 p444 在低磷胁迫下花青素积累少于 WT第49-50页
    3.8 p444 在低磷胁迫下侧根密度侧根密度的增加多于 WT第50-51页
    3.9 p444 的遗传背景分析第51-52页
    3.10 p444 突变体图位克隆第52-57页
        3.10.1 图位克隆样本的获得第52页
        3.10.2 粗定位第52-54页
        3.10.3 细定位第54-55页
        3.10.4 突变位点的确定第55-56页
        3.10.5 突变基因的生物信息学分析第56-57页
    3.11 p444 与 p444M 在低磷胁迫下根际酸化弱于 WT第57-58页
    3.12 P444::PCAMBIA1381-GUS 载体构建第58-61页
4 讨论第61-63页
    4.1 p444 酸化表型分析第61页
    4.2 p444 低磷表型分析第61-62页
    4.3 突变基因 P444 功能分析第62-63页
5 结论第63-65页
参考文献第65-73页
致谢第73-74页

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