| 致谢 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1.1 TLP(TBP-like protein)的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 TBP(TATA box binding protein)的结构及功能 | 第13-14页 |
| 1.1.2 TBP的其它功能 | 第14-15页 |
| 1.1.3 TLP与TBP的区别 | 第15-17页 |
| 1.1.4 TLP在精子发生中的功能 | 第17页 |
| 1.1.5 TLP在胚胎形成中的功能 | 第17页 |
| 1.2 肿瘤发生机制及与细胞周期的关系 | 第17-25页 |
| 1.2.1 癌症的产生 | 第17-19页 |
| 1.2.2 肿瘤的能量代谢 | 第19-20页 |
| 1.2.3 细胞周期与肿瘤 | 第20-23页 |
| 1.2.4 周期紊乱与癌症 | 第23-25页 |
| 1.3 肿瘤治疗的途径 | 第25-30页 |
| 1.3.1 分子靶向治疗 | 第25-28页 |
| 1.3.2 多糖的抗肿瘤作用 | 第28-29页 |
| 1.3.3 衰老与癌症 | 第29-30页 |
| 1.4 癌症的早期诊断 | 第30-33页 |
| 1.4.1 细胞周期是癌症诊断的新途径 | 第30-31页 |
| 1.4.2 DNA复制的控制与癌症发生的关系 | 第31-32页 |
| 1.4.3 细胞周期研究对于肿瘤诊断的重要作用 | 第32-33页 |
| 第二章 pEGFP-TLP表达载体的构建 | 第33-49页 |
| 引言 | 第33-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-38页 |
| 2.1.1 菌种 | 第35页 |
| 2.1.2 质粒 | 第35页 |
| 2.1.3 酶 | 第35-36页 |
| 2.1.4 试剂盒 | 第36页 |
| 2.1.5 缓冲液 | 第36页 |
| 2.1.6 培养基 | 第36-37页 |
| 2.1.7 电泳凝胶的配制 | 第37页 |
| 2.1.8 主要仪器和设备 | 第37-38页 |
| 2.1.9 其它试剂 | 第38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-44页 |
| 2.2.1 RT-PCR | 第38-40页 |
| 2.2.2 酶切反应 | 第40-41页 |
| 2.2.3 酶切产物的电泳及回收 | 第41页 |
| 2.2.4 pEGFP-N1载体的酶切产物去磷酸化 | 第41页 |
| 2.2.5 DNA连接反应 | 第41-42页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态的制备 | 第42页 |
| 2.2.7 连接产物转化感受态细胞、涂板 | 第42-43页 |
| 2.2.8 PCR检测、测序、冻存 | 第43页 |
| 2.2.9 质粒中抽 | 第43-44页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第44-47页 |
| 2.3.1 PCR克隆TLP基因CDS序列 | 第44-45页 |
| 2.3.2 双酶切结果 | 第45-46页 |
| 2.3.3 测序结果 | 第46-47页 |
| 本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 重组质粒EGFP-TLP的转染及鉴定 | 第49-58页 |
| 引言 | 第49-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第50页 |
| 3.1.1 试剂 | 第50页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第50页 |
| 3.1.3 细胞系 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-53页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第50-51页 |
| 3.2.2 质粒转染细胞系 | 第51-52页 |
| 3.2.3 激光共聚焦显微镜检测GFP的表达 | 第52页 |
| 3.2.4 Hoechst 33258染色 | 第52页 |
| 3.2.5 流式细胞术检测转染效率 | 第52-53页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第53-55页 |
| 3.3.1 外源质粒在细胞中表达 | 第53页 |
| 3.3.2 TLP于细胞核中表达 | 第53-54页 |
| 3.3.3 转染效率随转染时间的延长而提高 | 第54-55页 |
| 本章小结 | 第55-58页 |
| 第四章 TLP对细胞增殖的影响 | 第58-67页 |
| 引言 | 第58-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第59页 |
| 4.1.1 试剂 | 第59页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第59页 |
| 4.1.3 细胞系 | 第59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-62页 |
| 4.2.1 RNAi诱导细胞中TLP表达沉默 | 第59-60页 |
| 4.2.2 RT-PCR检测不同处理后细胞中TLP的转录水平 | 第60页 |
| 4.2.3 MTT法检测转染后细胞的活性 | 第60-61页 |
| 4.2.4 Hoechst 33258染色检测细胞的生长状态 | 第61-62页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第62-65页 |
| 4.3.1 RT-PCR检测TLP转录水平 | 第62页 |
| 4.3.2 TLP对HeLa细胞的抑制效果最明显 | 第62-63页 |
| 4.3.3 TLP抑制HeLa细胞的增殖 | 第63-64页 |
| 4.3.4 TLP过表达使HeLa细胞核形态异常 | 第64-65页 |
| 本章小结 | 第65-67页 |
| 第五章 TLP对HeLa细胞的周期阻滞作用 | 第67-79页 |
| 引言 | 第67-69页 |
| 5.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 5.1.1 试剂 | 第69页 |
| 5.1.2 缓冲液的配制 | 第69-70页 |
| 5.1.3 仪器和设备 | 第70页 |
| 5.2 实验方法 | 第70-73页 |
| 5.2.1 流式细胞术检测TLP对细胞周期的影响 | 第70-71页 |
| 5.2.2 RT-PCR检测周期相关基因的转录水平 | 第71-72页 |
| 5.2.3 Western blot检测周期相关基因的翻译水平 | 第72-73页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第73-76页 |
| 5.3.1 TLP能延长HeLa细胞的G2期 | 第73-74页 |
| 5.3.2 过表达TLP的细胞CDK1、CyclinB1的转录水平降低 | 第74-75页 |
| 5.3.3 过表达TLP的细胞CDK1、CyclinB1的表达水平降低 | 第75-76页 |
| 本章小结 | 第76-79页 |
| 第六章 结论与创新点 | 第79-83页 |
| 6.1 结论 | 第79-80页 |
| 6.1.1 pEGFP-TLP载体的构建 | 第79页 |
| 6.1.2 质粒转染 | 第79页 |
| 6.1.3 TLP抑制HeLa细胞的增殖 | 第79-80页 |
| 6.1.4 TLP对HeLa细胞周期的影响及机制研究 | 第80页 |
| 6.2 主要创新点 | 第80-81页 |
| 6.3 展望 | 第81-83页 |
| 附录：英文缩写对照表 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 作者简历 | 第89页 |
