| 符号说明 | 第4-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 前言 | 第16-34页 |
| 1. 基因Ⅶ型新城疫病毒的研究进展 | 第16-23页 |
| 1.1 NDV 的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 NDV 的形态学特征 | 第17页 |
| 1.3 NDV 的一般生物学特性 | 第17-19页 |
| 1.3.1 血凝性和神经氨酸酶活性 | 第17-18页 |
| 1.3.2 NDV 的致病性 | 第18页 |
| 1.3.3 NDV 的理化特性 | 第18-19页 |
| 1.3.4 NDV 的培养特性 | 第19页 |
| 1.4 NDV 的分子生物学特性 | 第19-22页 |
| 1.4.1 NDV 的主要蛋白及功能 | 第19-21页 |
| 1.4.2 F 蛋白和 HN 蛋白的生物学特性 | 第21-22页 |
| 1.5 新城疫疫苗 | 第22-23页 |
| 1.5.1 常规疫苗 | 第22页 |
| 1.5.2 基因工程疫苗 | 第22-23页 |
| 2. 腺病毒表达载体的研究进展 | 第23-30页 |
| 2.1 腺病毒的结构及命名 | 第23-25页 |
| 2.1.1 腺病毒的命名 | 第23-24页 |
| 2.1.2 腺病毒的结构特征 | 第24-25页 |
| 2.2 腺病毒基因产物的主要功能 | 第25-26页 |
| 2.2.1 E1 区基因表达产物 | 第25-26页 |
| 2.2.2 E2 区基因表达产物 | 第26页 |
| 2.2.3 E3 区基因表达产物 | 第26页 |
| 2.2.4 E4 区基因表达产物 | 第26页 |
| 2.3 腺病毒载体简介 | 第26-30页 |
| 2.3.1 腺病毒载体的作用机制 | 第27页 |
| 2.3.2 腺病毒载体的分类 | 第27-29页 |
| 2.3.3 腺病毒表达系统的特点 | 第29-30页 |
| 3. NDV 亚单位疫苗的研究进展 | 第30-34页 |
| 第一部分 六株新城疫病毒 F 基因和 HN 基因的克隆及序列分析 | 第34-52页 |
| 1. 材料 | 第34-35页 |
| 1.1 SPF 鸡胚 | 第34页 |
| 1.2 菌（毒）株及质粒载体 | 第34页 |
| 1.3 主要试剂及工具酶 | 第34页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第34-35页 |
| 1.5 主要仪器 | 第35页 |
| 2. 方法 | 第35-43页 |
| 2.1 病毒的增殖及纯化 | 第35页 |
| 2.2 病毒 RNA 的提取 | 第35-37页 |
| 2.3 RT 反应 | 第37页 |
| 2.4 PCR 反应 | 第37-38页 |
| 2.5 PCR 产物的克隆 | 第38-40页 |
| 2.5.1 PCR 产物的回收纯化 | 第38-39页 |
| 2.5.2 连接 | 第39-40页 |
| 2.5.3 转化 | 第40页 |
| 2.6 重组质粒的鉴定 | 第40-43页 |
| 2.6.1 挑选阳性质粒 | 第40页 |
| 2.6.2 质粒的提取 | 第40-42页 |
| 2.6.3 酶切鉴定 | 第42页 |
| 2.6.4 测序 | 第42页 |
| 2.6.5 序列分析 | 第42-43页 |
| 3. 结果 | 第43-50页 |
| 3.1 RT-PCR 结果 | 第43-44页 |
| 3.2 重组质粒的双酶切鉴定结果 | 第44-46页 |
| 3.3 序列分析结果 | 第46-50页 |
| 3.3.1 F 基因的遗传变异分析 | 第46-48页 |
| 3.3.2 HN 基因的遗传变异分析 | 第48-50页 |
| 4. 讨论 | 第50-51页 |
| 5. 小结 | 第51-52页 |
| 第二部分 基因Ⅶ型新城疫病毒 HN 基因真核表达载体的构建 | 第52-64页 |
| 1. 材料 | 第52-54页 |
| 1.1 病毒及细胞 | 第52页 |
| 1.2 载体及菌株 | 第52页 |
| 1.3 主要试剂及工具酶 | 第52页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第52-54页 |
| 1.5 主要仪器 | 第54页 |
| 2. 方法 | 第54-60页 |
| 2.1 新城疫病毒 HN 基因的克隆及重组 HN 基因的构建 | 第54-56页 |
| 2.1.1 HN 基因的扩增 | 第54-55页 |
| 2.1.2 Ferritin 基因的合成 | 第55页 |
| 2.1.3 重叠延伸 PCR 扩增 Ferritin+HN 基因 | 第55-56页 |
| 2.2 NDV HN 基因重组真核表达载体的构建 | 第56-58页 |
| 2.2.1 Ferritin+HN 片段酶切回收 | 第56页 |
| 2.2.2 真核表达载体 pCI-neo 的酶切回收 | 第56-57页 |
| 2.2.3 重组真核表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 2.3 阳性重组表达载体在真核细胞中的表达 | 第58-59页 |
| 2.3.1 提取重组表达载体 pCI-F+HN | 第58-59页 |
| 2.3.2 重组表达载体转染 293A 细胞 | 第59页 |
| 2.4 应用 SDS-PAGE 鉴定表达的 HN 蛋白 | 第59-60页 |
| 2.4.1 蛋白的收获 | 第59页 |
| 2.4.2 SDS-PAGE | 第59-60页 |
| 2.5 应用 Western-blot 鉴定表达的 HN 蛋白 | 第60页 |
| 3. 结果与分析 | 第60-62页 |
| 3.1 HN 基因与 Ferritin 基因扩增结果 | 第60-61页 |
| 3.2 Ferritin+HN 基因扩增结果 | 第61页 |
| 3.3 重组真核表达载体经 MluⅠ、SalⅠ双酶切结果 | 第61-62页 |
| 3.4 Western Blot 结果 | 第62页 |
| 4. 讨论 | 第62-63页 |
| 5. 小结 | 第63-64页 |
| 第三部分 基因Ⅶ型 NDV HN 基因重组腺病毒载体的构建及表达 | 第64-81页 |
| 1. 材料 | 第64-65页 |
| 1.1 菌株及载体 | 第64页 |
| 1.2 细胞 | 第64页 |
| 1.3 主要试剂及工具酶 | 第64-65页 |
| 2. 方法 | 第65-75页 |
| 2.1 重组腺病毒载体的构建 | 第65-70页 |
| 2.1.1 NDV HN 基因的扩增及鉴定 | 第65-66页 |
| 2.1.1.1 NDV HN 基因的 PCR 反应 | 第65页 |
| 2.1.1.2 PCR 产物的纯化及鉴定 | 第65-66页 |
| 2.1.2 穿梭质粒的复苏及鉴定 | 第66-67页 |
| 2.1.2.1 穿梭质粒（pShuttle CMV）的复苏 | 第66-67页 |
| 2.1.2.2 pShuttle CMV 质粒的鉴定 | 第67页 |
| 2.1.3 重组穿梭质粒的构建 | 第67-68页 |
| 2.1.4 重组质粒的扩增、纯化 | 第68-70页 |
| 2.1.4.1 大肠杆菌 BJ5183（内含 pAdEasy-1 骨架质粒）感受态细胞的制备 | 第68-69页 |
| 2.1.4.2 用 PmeⅠ单酶切线性化重组穿梭质粒 | 第69页 |
| 2.1.4.3 重组质粒的扩增纯化 | 第69-70页 |
| 2.2 重组病毒质粒转导 293A 细胞 | 第70-72页 |
| 2.2.1 重组质粒用 PacⅠ单酶切重组病毒质粒 | 第70页 |
| 2.2.2 酶切产物回收 | 第70-71页 |
| 2.2.3 转导 293A 细胞 | 第71页 |
| 2.2.4 293A 细胞的培养 | 第71-72页 |
| 2.3 重组病毒的鉴定 | 第72-75页 |
| 2.3.1 PCR 鉴定 | 第72-73页 |
| 2.3.2 Western-blot 鉴定 | 第73-75页 |
| 2.3.2.1 SDS-PAGE | 第73-74页 |
| 2.3.2.2 转印 | 第74页 |
| 2.3.2.3 免疫反应 | 第74-75页 |
| 3. 结果 | 第75-80页 |
| 3.1 HN 基因 PCR 扩增结果 | 第75页 |
| 3.2 HN 基因和 pShuttle CMV 双酶切结果 | 第75-76页 |
| 3.3 重组质粒双酶切鉴定结果 | 第76-77页 |
| 3.4 重组质粒 PmeⅠ酶切鉴定结果 | 第77-78页 |
| 3.5 重组质粒 PacⅠ酶切鉴定结果 | 第78页 |
| 3.6 重组病毒转染 293A 细胞结果 | 第78-79页 |
| 3.7 重组病毒 pShuttle CMV-HN PCR 鉴定结果 | 第79页 |
| 3.8 重组病毒 pShuttle CMV-HN Western-blot 鉴定结果 | 第79-80页 |
| 4. 讨论 | 第80页 |
| 5. 小结 | 第80-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第90页 |
