| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 符号与缩略语说明 | 第15-16页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-41页 |
| 第一节 拟除虫菊酯类杀虫剂简介 | 第17-19页 |
| 第二节 菊酯类杀虫剂在环境中的残留和对非靶标生物的毒害 | 第19-21页 |
| 1 菊酯类杀虫剂在环境中的残留 | 第19-20页 |
| 2 菊酯类杀虫剂对非靶标生物的毒害 | 第20-21页 |
| 第三节 菊酯类杀虫剂微生物降解研究进展 | 第21-30页 |
| 1 菊酯降解菌株的分离 | 第22-23页 |
| 2 菊酯的微生物降解途径 | 第23-25页 |
| 3 菊酯水解酶的纯化和基因克隆 | 第25-27页 |
| 4 羧酸酯酶结构和催化机制 | 第27-28页 |
| 5 菊酯的手性毒性及降解 | 第28-30页 |
| 第四节 菊酯类杀虫剂残留的微生物修复 | 第30-32页 |
| 第五节 菊酯微生物降解研究存在的问题和本研究的意义 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-41页 |
| 第二章 菊酯降解菌株JZ-1的鉴定和降解特性研究 | 第41-85页 |
| 第一节 菊酯降解菌株JZ-1分类地位鉴定 | 第41-64页 |
| 1 材料与方法 | 第42-52页 |
| 1.1 菌株、培养基 | 第42页 |
| 1.2 生长温度测定 | 第42页 |
| 1.3 菌株pH耐受范围和最适pH测定 | 第42页 |
| 1.4 菌株耐盐性和生长最适盐浓度 | 第42页 |
| 1.5 Biolog检测 | 第42-43页 |
| 1.6 API 20 NE检测 | 第43-44页 |
| 1.7 呼吸醌系统分析 | 第44页 |
| 1.8 多胺模式分析 | 第44页 |
| 1.9 极脂组分分析 | 第44-45页 |
| 1.10 细胞壁脂肪酸分析 | 第45-46页 |
| 1.11 核糖体16S rDNA序列分析 | 第46-48页 |
| 1.12 G+C mol%的测定 | 第48-49页 |
| 1.13 DNA-DNA杂交 | 第49-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-64页 |
| 2.1 形态及特征 | 第52-53页 |
| 2.2 生理生化特征 | 第53-57页 |
| 2.3 化学分类 | 第57-60页 |
| 2.4 基因型分类 | 第60-62页 |
| 2.5 结论和新种描述(附英文对照) | 第62-64页 |
| 第二节 菌株JZ-1的降解特性研究 | 第64-77页 |
| 1 材料与方法 | 第64-67页 |
| 1.1 菌株、试剂 | 第64页 |
| 1.2 菌株JZ-1对菊酯降解的测定 | 第64-65页 |
| 1.3 温度和初始pH值对菌株JZ-1降解菊酯效率的影响 | 第65页 |
| 1.4 金属离子对菌株JZ-1降解菊酯效率的影响 | 第65页 |
| 1.5 碳氮源对菌株JZ-1的生长和降解菊酯效率影响 | 第65-66页 |
| 1.6 菌株JZ-1接种量对菊酯降解效率的影响 | 第66页 |
| 1.7 菌株JZ-1粗酶液的制备 | 第66页 |
| 1.8 菌株JZ-1降解氯氰菊酯的代谢产物鉴定 | 第66页 |
| 1.9 菌株JZ-1对部分芳香族化合物的降解和相应酶活测定 | 第66-67页 |
| 1.10 菌株JZ-1对顺/反式氯菊酯和氯氰菊酯的降解 | 第67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-77页 |
| 2.1 菌株JZ-1对菊酯的降解 | 第67-69页 |
| 2.2 温度、初始pH和金属离子对降解的影响 | 第69-70页 |
| 2.3 碳氮源对菌株JZ-1生长和降解菊酯效率影响 | 第70页 |
| 2.4 菌株JZ-1接种量对菊酯降解效率的影响 | 第70-71页 |
| 2.5 菊酯水解酶活性和诱导类型 | 第71-72页 |
| 2.6 菌株JZ-1降解氯氰菊酯的代谢产物检测 | 第72-75页 |
| 2.7 3-苯氧基苯甲酸下游产物检测 | 第75-76页 |
| 2.8 菌株JZ-1对顺反异构体的选择性 | 第76-77页 |
| 本章讨论 | 第77-79页 |
| 本章小节 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-85页 |
| 第三章 菊酯水解酶(PytH)的基因克隆、表达和酶学特性研究 | 第85-129页 |
| 第一节 菊酯水解酶(PytH)的基因克隆 | 第85-101页 |
| 1 材料与方法 | 第86-93页 |
| 1.1 所用菌株和质粒 | 第86页 |
| 1.2 酶、试剂和培养基配方 | 第86-87页 |
| 1.3 鸟枪法构建基因文库示意图 | 第87-88页 |
| 1.4 高效感受态细胞的制备 | 第88-89页 |
| 1.5 总DNA提取 | 第89页 |
| 1.6 质粒DNA少量提取 | 第89页 |
| 1.7 质粒DNA快速检测 | 第89页 |
| 1.8 总DNA部分酶切体系建立 | 第89-90页 |
| 1.9 凝胶电泳回收酶切片段 | 第90-91页 |
| 1.10 酶连体系 | 第91-92页 |
| 1.11 转化和基因文库的构建 | 第92页 |
| 1.12 基因序列分析 | 第92-93页 |
| 1.13 阳性克隆降解菊酯农药检测 | 第93页 |
| 2 结果与分析 | 第93-101页 |
| 2.1 菌株JZ-1总DNA提取和Sau3AI酶切 | 第93页 |
| 2.2 阳性克隆的获得 | 第93-95页 |
| 2.3 阳性克隆测序和ORF分析 | 第95页 |
| 2.4 pytH核酸序列分析 | 第95-96页 |
| 2.5 pytH启动子预测 | 第96页 |
| 2.6 PytH氨基酸序列分析 | 第96-99页 |
| 2.7 信号肽分析 | 第99页 |
| 2.8 PytH二级结构预测 | 第99-101页 |
| 第二节 菊酯水解酶(PytH)蛋白原核表达和纯化 | 第101-110页 |
| 1 材料与方法 | 第101-106页 |
| 1.1 试剂和培养基 | 第101页 |
| 1.2 所用菌株和质粒 | 第101页 |
| 1.3 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第101页 |
| 1.4 菊酯水解酶基因PCR扩增 | 第101-102页 |
| 1.5 表达载体的构建 | 第102-103页 |
| 1.6 菊酯水解酶表达菌株构建和诱导表达 | 第103-104页 |
| 1.7 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第104-105页 |
| 1.8 表达菌株质粒和表达的稳定性 | 第105页 |
| 1.9 PytH蛋白的Ni-NTA亲和层析纯化 | 第105-106页 |
| 1.10 平板法检测融合表达的菊酯水解酶PytH活性 | 第106页 |
| 2 结果与方法 | 第106-110页 |
| 2.1 PCR扩增的菊酯水解酶基因 | 第107页 |
| 2.2 菊酯水解酶在大肠杆菌中的表达 | 第107-108页 |
| 2.3 菊酯水解酶蛋白的纯化 | 第108-109页 |
| 2.4 表达菌株在传代过程中质粒和表达的稳定性 | 第109-110页 |
| 第三节 菊酯水解酶(PytH)酶学特性研究 | 第110-122页 |
| 1 材料与方法 | 第110-115页 |
| 1.1 试剂和培养基 | 第110页 |
| 1.2 PytH分子量测定 | 第110-111页 |
| 1.3 等电点pI的测定 | 第111页 |
| 1.4 PytH活力测定 | 第111-112页 |
| 1.5 温度对PytH活力影响 | 第112页 |
| 1.6 pH值对PytH活力影响 | 第112-113页 |
| 1.7 金属离子和化学试剂对PytH活力影响 | 第113页 |
| 1.8 PytH对菊酯立体异构体的选择性 | 第113页 |
| 1.9 PytH定点突变 | 第113-115页 |
| 2 结果与分析 | 第115-122页 |
| 2.1 分子量测定 | 第115-116页 |
| 2.2 等电点pI测定 | 第116-117页 |
| 2.3 PytH对不同底物的动力学常数 | 第117页 |
| 2.4 PytH热稳定性和最适温度 | 第117-120页 |
| 2.5 PytH酸碱稳定性和最适pH值 | 第120页 |
| 2.6 金属离子和化学试剂对酶活力影响 | 第120页 |
| 2.7 PytH对菊酯降解的立体异构选择性 | 第120-121页 |
| 2.8 PytH突变体的活性 | 第121-122页 |
| 本章讨论 | 第122-124页 |
| 本章小节 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-129页 |
| 全文总结 | 第129-131页 |
| 博士论文创新点 | 第131-133页 |
| 附录 | 第133-151页 |
| 博士期间发表论文和专利申请 | 第151-153页 |
| 致谢 | 第153页 |
