| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 致病真菌的多药物耐药性及其研究现状 | 第12-15页 |
| 1.2 酿酒酵母中的多药耐药转运蛋白及调控网络 | 第15-17页 |
| 1.3 PDR5P的结构和功能的研究现状 | 第17-20页 |
| 1.4 研究课题的提出 | 第20-22页 |
| 第二章 氟康唑高敏感的PDR5P突变体筛选 | 第22-31页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.2.2 实验仪器和设备 | 第22页 |
| 2.2.3 培养基、试剂和溶液 | 第22页 |
| 2.2.4 基础分子生物学实验 | 第22-23页 |
| 2.2.5 PCR随机诱变PDR5 | 第23页 |
| 2.2.6 随机诱变YEplac195-BPDR5转化入G1菌株 | 第23-24页 |
| 2.2.7 平板影印筛选氟康唑高敏感菌株和突变位点定位 | 第24-26页 |
| 2.3 实验结果 | 第26-29页 |
| 2.3.1 C793F和S1230F的位点突变能导致Pdr5p丧失氟康唑转运能力 | 第26-27页 |
| 2.3.2 突变位点分析 | 第27-29页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第29-31页 |
| 第三章 C793F和S1230F突变菌株功能分析和多药物耐药性研究 | 第31-46页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 材料与方法 | 第31-38页 |
| 3.2.1 菌株、质粒、主要仪器设备 | 第31页 |
| 3.2.2 基础分子生化实验 | 第31-32页 |
| 3.2.3 培养基、试剂与溶液 | 第32页 |
| 3.2.4 C793F和S1230F突变菌株的Pdr5p的罗丹明6G外排能力检测 | 第32-33页 |
| 3.2.5 Pdr5p突变体ATP酶活 | 第33-35页 |
| 3.2.6 C793F和S1230F突变菌株的Pdr5p的表达和定位实验 | 第35-36页 |
| 3.2.7 C793F和S1230F突变菌株的多药物耐药性分析 | 第36-37页 |
| 3.2.8 C793F和S1230F突变菌株在各种底物药物中相对生长率检测 | 第37-38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-44页 |
| 3.3.1 C793F和S1230F突变导致Pdr5p的罗丹明6G外排能力受损 | 第38-39页 |
| 3.3.2 C793F和S1230F突变体的Pdr5p特异性ATP酶活分析 | 第39-40页 |
| 3.3.3 Pdr5 C793F和S1230F突变体的定位和表达研究 | 第40-41页 |
| 3.3.4 C793F和S1230F突变体的多药物耐药性分析 | 第41-44页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第44-46页 |
| 第四章 C793和S1230突变的功能研究 | 第46-58页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 材料与方法 | 第46-50页 |
| 4.2.1 菌株、质粒和主要仪器设备 | 第46页 |
| 4.2.2 培养基、试剂和溶液 | 第46页 |
| 4.2.3 基础分子生物学操作 | 第46-47页 |
| 4.2.4 酿酒酵母转化 | 第47页 |
| 4.2.5 酿酒酵母基因组和质粒提取 | 第47-48页 |
| 4.2.6 PCR介导的定点突变菌株构建 | 第48-49页 |
| 4.2.7 构建菌株的多药物耐药性实验 | 第49页 |
| 4.2.8 Pdr5突变体功能和定位分析 | 第49页 |
| 4.2.9 测定各个菌株的相对生长率 | 第49-50页 |
| 4.3 实验结果 | 第50-55页 |
| 4.3.1 C793Y的位点突变导致Pdr5p外排功能受损 | 第50-52页 |
| 4.3.2 C793Y突变导致Pdr5p外排功能受损与其氨基酸特性相关 | 第52-53页 |
| 4.3.3 793位点残基空间体积、1230位点残基空间体积和极性影响Pdr5p介导的药物外排功能 | 第53-55页 |
| 4.4 讨论和小结 | 第55-58页 |
| 第五章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 附录 | 第60-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
| 攻读硕士学位期间的主要研究成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
