| 致谢 | 第10-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 缩略语 | 第15-17页 |
| 第1章 文献综述 | 第17-31页 |
| 1 神经鞘磷脂的生物合成 | 第17-20页 |
| 1.1 神经鞘磷脂的从头合成 | 第17-18页 |
| 1.2 神经鞘磷脂的其他合成途径及它的类似物 | 第18-19页 |
| 1.3 神经鞘磷脂合成的生物学重要性 | 第19-20页 |
| 2 鞘磷脂合酶家族 | 第20-28页 |
| 2.1 鞘磷脂合酶基因的克隆策略 | 第20-22页 |
| 2.2 鞘磷脂合酶的结构特点与反应机制 | 第22-23页 |
| 2.3 鞘磷脂合酶相关蛋白 | 第23-25页 |
| 2.4 鞘磷脂合酶的生物学重要性 | 第25-28页 |
| 3 昆虫鞘脂质代谢研究进展 | 第28-30页 |
| 3.1 昆虫和果蝇的鞘脂质 | 第28-29页 |
| 3.2 鞘脂质生物合成途径中的相关酶类 | 第29-30页 |
| 4 本研究背景 | 第30页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 第2章 赤拟谷盗SMS1基因的克隆、表达及特征化 | 第31-61页 |
| 引言 | 第31页 |
| 1 实验材料 | 第31-35页 |
| 1.1 赤拟谷盗 | 第31-32页 |
| 1.2 菌种、细胞系和真核表达系统 | 第32页 |
| 1.3 试剂 | 第32页 |
| 1.4 工具酶 | 第32页 |
| 1.5 仪器设备 | 第32-33页 |
| 1.6 试剂配制 | 第33-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-43页 |
| 2.1 赤拟谷盗SMS1基因的克隆及序列分析 | 第35-38页 |
| 2.1.1 总RNA提取 | 第35页 |
| 2.1.2 cDNA第一链合成 | 第35-36页 |
| 2.1.3 PCR引物设计 | 第36页 |
| 2.1.4 PCR扩增 | 第36页 |
| 2.1.5 PCR产物纯化及克隆 | 第36-37页 |
| 2.1.6 感受态细胞制备(C_aCl_2法) | 第37页 |
| 2.1.7 连接转化 | 第37页 |
| 2.1.8 赤拟谷盗SMS1基因序列特征分析 | 第37-38页 |
| 2.2 赤拟谷盗SMS1基因的真核表达 | 第38-39页 |
| 2.2.1 重组杆状病毒转移质粒pFastBacHT-SMS1的构建 | 第38页 |
| 2.2.2 重组Bacmid的获得 | 第38页 |
| 2.2.3 昆虫细胞培养、转染及重组病毒的感染 | 第38页 |
| 2.2.4 Tn细胞microsomes提取 | 第38-39页 |
| 2.2.5 BCA测定蛋白浓度 | 第39页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE及Western blot分析 | 第39页 |
| 2.3 赤拟谷盗SMS1蛋白产物的生化特性 | 第39-41页 |
| 2.3.1 酶活测定 | 第39-40页 |
| 2.3.2 酶的其他生化特性测定 | 第40页 |
| 2.3.3 鞘脂质提取 | 第40页 |
| 2.3.4 HPLC分析 | 第40-41页 |
| 2.3.5 结果处理 | 第41页 |
| 2.4 TcSMS1基因的时空表达特性 | 第41-43页 |
| 2.4.1 cDNA模板准备 | 第41-42页 |
| 2.4.2 引物设计 | 第42页 |
| 2.4.3 Real time-PCR体系建立 | 第42页 |
| 2.4.4 数据分析 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-57页 |
| 3.1 SMS1基因的克隆与真核表达 | 第43-50页 |
| 3.1.1 SMS1基因RT-PCR扩增及序列测定 | 第43页 |
| 3.1.2 SMS1基因序列分析 | 第43-48页 |
| 3.1.3 重组杆状病毒转移载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.1.4 重组病毒Bacmid获得及重组Bacmid的转染、鉴定 | 第49-50页 |
| 3.1.5 SDS-PAGEA及Western Blot分析 | 第50页 |
| 3.2 赤拟谷盗SMS1蛋白产物的生化特性 | 第50-55页 |
| 3.2.1 HPLC条件的建立 | 第50-51页 |
| 3.2.2 赤拟谷盗SMS1蛋白产物的活力测定 | 第51-52页 |
| 3.2.3 TcSMS1酶的其他生化特性测定 | 第52-55页 |
| 3.3 TcSMS1基因在赤拟谷盗体内的时空表达特异性 | 第55-57页 |
| 3.3.1 TcSMS1基因在赤拟谷盗体内的组织表达特异性 | 第55-56页 |
| 3.3.2 TcSMS1基因在赤拟谷盗体内的发育表达特异性 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| 第3章 二化螟SMSR基因的克隆、真核表达及表达谱分析 | 第61-84页 |
| 引言 | 第61页 |
| 1 实验材料 | 第61-63页 |
| 1.1 二化螟 | 第61-62页 |
| 1.2 菌种、细胞系和真核表达系统 | 第62页 |
| 1.3 试剂 | 第62页 |
| 1.4 工具酶 | 第62页 |
| 1.5 仪器设备 | 第62-63页 |
| 2 实验方法 | 第63-71页 |
| 2.1 二化螟SMSr基因的克隆及序列分析 | 第63-69页 |
| 2.1.1 二化螟SMSr基因部分序列的扩增 | 第63页 |
| 2.1.2 5’和3’Race PCR引物设计 | 第63-64页 |
| 2.1.3 二化螟SMSr基因5’端扩增 | 第64-67页 |
| 2.1.3.1 RNA样品制备 | 第64-66页 |
| 2.1.3.2 反转录反应 | 第66页 |
| 2.1.3.3 套式PCR扩增反应 | 第66-67页 |
| 2.1.4 二化螟SMSr基因3’端扩增 | 第67-69页 |
| 2.1.4.1 反转录反应 | 第67-68页 |
| 2.1.4.2 套式PCR扩增反应 | 第68-69页 |
| 2.1.5 二化螟SMSr基因的全长扩增 | 第69页 |
| 2.1.6 二化螟SMSr基因的序列分析 | 第69页 |
| 2.2 二化螟SMSr基因的真核表达 | 第69-70页 |
| 2.3 二化螟SMSr蛋白的时空表达特性 | 第70-71页 |
| 2.3.1 cDNA模板准备 | 第70页 |
| 2.3.2 引物设计 | 第70页 |
| 2.3.3 Real time-PCR体系建立 | 第70-71页 |
| 2.3.4 数据分析 | 第71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-82页 |
| 3.1 二化螟SMSr基因的克隆及真核表达 | 第71-79页 |
| 3.1.0 二化螟SMSr基因部分序列的扩增 | 第71-72页 |
| 3.1.1 二化螟SMSr基因5’和3’Race扩增 | 第72-74页 |
| 3.1.2 二化螟SMSr基因cDNA序列的拼接及全长基因的扩增 | 第74页 |
| 3.1.3 二化螟SMSr基因的序列特征分析 | 第74-78页 |
| 3.1.4 重组杆状病毒转移载体的构建 | 第78页 |
| 3.1.5 重组病毒Bacmid获得及重组Bacmid的转染、鉴定 | 第78-79页 |
| 3.1.6 SDS-PAGEA及Western Blot分析 | 第79页 |
| 3.2 CsSMSr基因在二化螟体内的时空表达特异性 | 第79-82页 |
| 3.2.1 CsSMSr基因在二化螟体内的组织表达特异性 | 第79-81页 |
| 3.2.2 CsSMSr基因在二化螟体内的发育表达特异性 | 第81-82页 |
| 4 讨论 | 第82-84页 |
| 第4章 总结与讨论 | 第84-87页 |
| 1 结论与讨论 | 第84-86页 |
| 1.1 TcSMS1基因结构及蛋白特征化 | 第84-85页 |
| 1.2 TcSMS1对赤拟谷盗生理功能的初步探索 | 第85页 |
| 1.3 CsSMSr基因结构特征及真核表达 | 第85页 |
| 1.4 CsSMSr对二化螟生理功能的初步探索 | 第85-86页 |
| 2 本论文的创新之处 | 第86页 |
| 3 进一步研究方向 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 附录 | 第91-94页 |
| 作者简介 | 第94页 |
