| 摘要 | 第14-16页 |
| ABSTRACT | 第16-17页 |
| 第一章 前言 | 第18-38页 |
| 1.1 Tankyrase | 第18-26页 |
| 1.1.1 Tankyrase简介 | 第18页 |
| 1.1.2 Tankyrase的蛋白结构 | 第18-20页 |
| 1.1.3 Tankyrase的亚细胞定位 | 第20页 |
| 1.1.4 Tankyrase的功能 | 第20-24页 |
| 1.1.4.1 Tankyrase在端粒中的作用 | 第20-21页 |
| 1.1.4.2 Tankyrase在纺锤体中组装中的作用 | 第21页 |
| 1.1.4.3 Tankyrase在血糖运输中的作用 | 第21-22页 |
| 1.1.4.4 Tankyse在细胞凋亡中的作用 | 第22页 |
| 1.1.4.5 Tankyrase对Wnt信号通路的影响 | 第22-23页 |
| 1.1.4.6 Tankyrase在中心体中的作用 | 第23-24页 |
| 1.1.5 Tankyrase 2的功能 | 第24-25页 |
| 1.1.6 Tankyrase的抑制因子 | 第25页 |
| 1.1.7 Tankyrase在其它物种中的作用 | 第25-26页 |
| 1.1.7.1 Tankyrase在小鼠中的作用 | 第25页 |
| 1.1.7.2 Tankyrase在线虫中的作用 | 第25-26页 |
| 1.2 细胞凋亡 | 第26-30页 |
| 1.2.1 细胞凋亡的简介 | 第26-27页 |
| 1.2.2 细胞凋亡途径 | 第27-30页 |
| 1.2.2.1 外源性通路 | 第27-28页 |
| 1.2.2.2 内源性通路 | 第28-29页 |
| 1.2.2.3 细胞凋亡的执行 | 第29-30页 |
| 1.2.3 细胞凋亡诱导因子诱导的细胞凋亡 | 第30页 |
| 1.3 细胞坏死 | 第30-34页 |
| 1.3.1 细胞坏死的简介 | 第30-31页 |
| 1.3.2 细胞坏死的调节 | 第31-33页 |
| 1.3.1.1 配体、受体 | 第31页 |
| 1.3.1.2 离子通道和脂质 | 第31-32页 |
| 1.3.1.3 蛋白激酶 | 第32页 |
| 1.3.1.4 聚ADP聚核糖聚合酶 | 第32-33页 |
| 1.3.1.5 Bcl-2蛋白家族 | 第33页 |
| 1.3.1.6 热休克蛋白 | 第33-34页 |
| 1.4 果蝇中细胞凋亡 | 第34-38页 |
| 1.4.1 果蝇中参与细胞凋亡的分子 | 第35-36页 |
| 1.4.2 果蝇细胞凋亡的诱导 | 第36页 |
| 1.4.2.1 发育过程中细胞凋亡 | 第36页 |
| 1.4.2.2 压力诱导的细胞凋亡 | 第36页 |
| 1.4.3 细胞凋亡的抑制 | 第36-38页 |
| 第二章 材料与方法 | 第38-66页 |
| 2.1 常用药品和试剂 | 第38页 |
| 2.2 果蝇相关实验方法 | 第38-51页 |
| 2.2.1 果蝇品系 | 第38-39页 |
| 2.2.2 果蝇的饲养 | 第39页 |
| 2.2.3 果蝇基因组DNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.2.4 果蝇三龄幼虫的解剖 | 第40页 |
| 2.2.5 果蝇成虫盘的染色与铺片 | 第40-41页 |
| 2.2.6 果蝇显微注射 | 第41页 |
| 2.2.7 P因子介导的不精确剪切技术 | 第41-43页 |
| 2.2.8 果蝇UAS/Gal4双元表达系统 | 第43-45页 |
| 2.2.9 应用FLP/FRT技术产生嵌合体克隆 | 第45-49页 |
| 2.2.9.1 有丝分裂过程中的同源重组 | 第45-47页 |
| 2.2.9.2 FLP-out克隆分析 | 第47-49页 |
| 2.2.10 RAN干扰技术 | 第49-50页 |
| 2.2.11 果蝇卵孵化率计算 | 第50页 |
| 2.2.12 饥饿实验分析 | 第50页 |
| 2.2.13 Nile Red检测果蝇幼虫脂肪滴 | 第50-51页 |
| 2.2.14 甘油三酯(TAG)含量的检测 | 第51页 |
| 2.2.15 葡萄糖含量的检测 | 第51页 |
| 2.3 DNA相关实验方法 | 第51-62页 |
| 2.3.1 质粒载体 | 第51-54页 |
| 2.3.1.1 pBluescript SK(-)载体 | 第51-52页 |
| 2.3.1.2 pGEX载体 | 第52-53页 |
| 2.3.1.3 pUAST载体 | 第53-54页 |
| 2.3.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第54-55页 |
| 2.3.3 DNA转化 | 第55页 |
| 2.3.4 菌落PCR的鉴定 | 第55页 |
| 2.3.5 小规模质粒DNA的提取 | 第55-56页 |
| 2.3.6 质粒DNA的工具酶处理 | 第56-57页 |
| 2.3.6.1 DNA的限制性内切酶消化 | 第56页 |
| 2.3.6.2 线性DNA末端平滑化 | 第56-57页 |
| 2.3.6.3 线性DNA 5’端磷酸化 | 第57页 |
| 2.3.6.4 线性DNA 5’端磷酸基团的去除 | 第57页 |
| 2.3.7 DNA片段的纯化 | 第57-58页 |
| 2.3.7.1 琼脂糖电泳分离DNA | 第57-58页 |
| 2.3.7.2 DNA的回收 | 第58页 |
| 2.3.8 DNA连接反应 | 第58页 |
| 2.3.9 PCR反应 | 第58-59页 |
| 2.3.10 果蝇组织总RNA的提取 | 第59页 |
| 2.3.11 反转录PCR | 第59-60页 |
| 2.3.12 荧光定量PCR | 第60页 |
| 2.3.13 果蝇细胞表达载体的构建 | 第60-61页 |
| 2.3.13.1 果蝇全长Tankyrase表达质粒的构建 | 第60-61页 |
| 2.3.13.2 果蝇tankyrase缺失体表达质粒的构建 | 第61页 |
| 2.3.14 果蝇RNA干扰质粒的构建 | 第61-62页 |
| 2.3.15 细菌表达载体的构建 | 第62页 |
| 2.4 细胞培养及转染 | 第62页 |
| 2.5 蛋白质相关实验方法 | 第62-66页 |
| 2.5.1. 细胞免疫荧光染色 | 第62-63页 |
| 2.5.2 多克隆抗体的制备 | 第63-64页 |
| 2.5.2.1 融合蛋白的表达和纯化 | 第63-64页 |
| 2.5.2.2 抗体制备 | 第64页 |
| 2.5.2.3 抗体的纯化 | 第64页 |
| 2.5.3 TUNEL检测细胞凋亡方法 | 第64-66页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第66-89页 |
| 3.1 结果 | 第66-85页 |
| 3.1.1 果蝇Tankyrase在进化中是一个保守的蛋白 | 第66-71页 |
| 3.1.2 果蝇tankyrase突变体的获得 | 第71-73页 |
| 3.1.3 Tankyrase的敲除不会影响Wnt信号通路下游基因的表达 | 第73-74页 |
| 3.1.4 缺失tankyrase导致果蝇卵孵化率降低 | 第74-75页 |
| 3.1.5 Tankyrase缺失的果蝇葡萄糖含量升高 | 第75-76页 |
| 3.1.6 Tankyrase突变体对饥饿耐受力降低 | 第76-77页 |
| 3.1.7 Tankyrase突变体内TAG含量降低 | 第77-79页 |
| 3.1.8 过表达tankyrase影响果蝇眼睛和翅膀的发育 | 第79-80页 |
| 3.1.9 过表达tankyrase导致细胞竞争力降低 | 第80-82页 |
| 3.1.10 过表达tankyrase引起细胞凋亡 | 第82-83页 |
| 3.1.11 p35抑制细胞凋亡但是不能抑制眼睛的损伤 | 第83-84页 |
| 3.1.12 Ankyrin结构域引起细胞凋亡及眼睛和翅膀的损伤 | 第84-85页 |
| 3.2 讨论 | 第85-89页 |
| 参考文献 | 第89-102页 |
| 附录一 图表索引 | 第102-104页 |
| 附录二 缩略语及中英文对照 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
