| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 课题来源和背景 | 第9-10页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第10-14页 |
| 1.2.1 Arf 家族简介 | 第10页 |
| 1.2.2 Arfaptin 家族简介 | 第10页 |
| 1.2.3 Arfip2 基因简介 | 第10-11页 |
| 1.2.4 高尔基体的膜泡分泌调控 | 第11页 |
| 1.2.5 Arfip2 基因的研究现状 | 第11-14页 |
| 1.3 本课题研究的目的及意义 | 第14-15页 |
| 1.4 课题技术路线 | 第15-17页 |
| 第2章 材料和方法 | 第17-26页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.1 实验动物、菌种和载体 | 第17页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第18页 |
| 2.2 实验方法和步骤 | 第18-26页 |
| 2.2.1 实验胚胎制备 | 第18-19页 |
| 2.2.2 总 RNA 的提取和 cDNA 的制备 | 第19-20页 |
| 2.2.3 印记分析 | 第20-21页 |
| 2.2.4 RNA 探针的合成 | 第21-23页 |
| 2.2.5 全胚胎原位杂交 | 第23-24页 |
| 2.2.6 胚胎切片原位杂交 | 第24页 |
| 2.2.7 实时定量 RTPCR | 第24-25页 |
| 2.2.8 DNA 的提取及亚硫酸盐处理 | 第25-26页 |
| 第3章 实验结果 | 第26-41页 |
| 3.1 Arfip2 基因的信息学分析 | 第26-30页 |
| 3.1.1 Arfip2 的基因结构 | 第26页 |
| 3.1.2 Arfip2 的保守性分析 | 第26-28页 |
| 3.1.3 Arfip2 蛋白的疏水性和二级结构预测 | 第28-29页 |
| 3.1.4 小鼠 Arfip2 蛋白的高级结构 | 第29-30页 |
| 3.2 小鼠 Arfip2 基因的印记分析 | 第30-32页 |
| 3.2.1 Arfip2 基因的 SNP 位点检索 | 第30-31页 |
| 3.2.2 Arfip2 基因的印记鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3 Arfip2 在小鼠胚胎中的表达分析 | 第32-38页 |
| 3.3.1 DIG 标记的 RNA 探针的制备 | 第32-33页 |
| 3.3.2 全胚原位杂交分析 Arfip2 在小鼠胚期的表达 | 第33-34页 |
| 3.3.3 组织切片原位杂交分析 Arfip2 在小鼠胚期的表达 | 第34-37页 |
| 3.3.4 RTPCR 分析 Arfip2 在小鼠胚胎不同组织间的表达 | 第37-38页 |
| 3.4 Arfip2 基因在胚期小鼠组织中的甲基化分析 | 第38-40页 |
| 3.4.1 甲基化引物检测 | 第38-39页 |
| 3.4.2 亚硫酸盐测序分析 Arfip2 基因启动子区 | 第39-40页 |
| 3.5 本章小结 | 第40-41页 |
| 第4章 讨论 | 第41-45页 |
| 4.1 Arfip2 基因的生物信息学分析 | 第41-42页 |
| 4.2 Arfip2 基因的印记状态 | 第42页 |
| 4.3 Arfip2 基因在小鼠胚胎发育中后期的表达 | 第42-44页 |
| 4.4 Arfip2 基因启动子区甲基化状态的初步分析 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45页 |
| 展望 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录 Ⅰ 主要试剂配制 | 第50-53页 |
| 附录 Ⅱ 本课题所用引物及载体 | 第53-54页 |
| 附录 Ⅲ 切片原位杂交实验方法 | 第54-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
