| 摘要 | 第3-8页 |
| abstract | 第8-13页 |
| 第1章 引言 | 第20-27页 |
| 1.1 概述 | 第20-22页 |
| 1.2 AMPK的基本结构 | 第22页 |
| 1.3 AMPK对代谢的调节 | 第22-23页 |
| 1.4 AMPK的抑癌功能 | 第23-24页 |
| 1.5 AMPK的激活 | 第24-25页 |
| 1.6 ATM和MLK3在AMPK活化中的作用 | 第25-27页 |
| 第2章 胃癌及肺癌组织标本中LKB1/p-AMPK的表达水平 | 第27-37页 |
| 2.1 背景 | 第27-28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 组织标本 | 第28页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2.4 主要溶液的配制 | 第29页 |
| 2.2.5 免疫组化分析 | 第29-30页 |
| 2.2.6 统计学分析 | 第30-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-35页 |
| 2.3.1 胃癌及癌旁组织p-AMPK(Thr172)表达水平 | 第31页 |
| 2.3.2 胃癌及癌旁组织LKB1表达水平 | 第31-33页 |
| 2.3.3 不同阶段肺癌的p-AMPK表达 | 第33-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第3章 LKB1过表达对胃癌细胞SGC-7901 生物学行为的影响 | 第37-46页 |
| 3.1 背景 | 第37页 |
| 3.2 材料与方法 | 第37-40页 |
| 3.2.1 细胞株 | 第37页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第38页 |
| 3.2.4 慢病毒包装 | 第38-39页 |
| 3.2.5 细胞株构建 | 第39页 |
| 3.2.6 q RT-PCR验证细胞株 | 第39页 |
| 3.2.7 流式细胞仪检测CD44阳性细胞数 | 第39-40页 |
| 3.2.8 流式细胞仪检测细胞周期 | 第40页 |
| 3.2.9 MTT试验 | 第40页 |
| 3.2.10 细胞划痕试验 | 第40页 |
| 3.2.11 资料统计 | 第40页 |
| 3.3 结果 | 第40-44页 |
| 3.3.1 构建稳定表达LKB1的SGC-7901 细胞株 | 第40-41页 |
| 3.3.2 LKB1过表达对SGC-7901 细胞生物学行为的影响 | 第41-43页 |
| 3.3.3 LKB1过表达促进SGC-7901 细胞对抗癌药物的敏感性 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第4章 ATM和LKB1在依托泊苷激活AMPK中的作用 | 第46-58页 |
| 4.1 背景 | 第46-47页 |
| 4.2 材料与方法 | 第47-52页 |
| 4.2.1 细胞株 | 第47页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第47-49页 |
| 4.2.3 主要溶液配制 | 第49页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第49-50页 |
| 4.2.5 细胞培养 | 第50页 |
| 4.2.6 Western blot | 第50-51页 |
| 4.2.7 抗肿瘤药物刺激细胞实验 | 第51页 |
| 4.2.8 ATM si RNA和LKB1si RNA转染 | 第51-52页 |
| 4.2.9 功能性LKB1基因(Fuwcmv-HA-LKB1)慢病毒包装 | 第52页 |
| 4.2.10 稳定性LKB1表达细胞的构建 | 第52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-56页 |
| 4.3.1 抗肿瘤药物依托泊苷（Etoposide）激活肿瘤细胞中的ATM和AMPK。 | 第52-53页 |
| 4.3.2 ATM和LKB1介导依托泊苷引起的AMPK活化 | 第53-55页 |
| 4.3.3 依托泊苷对AMPK的激活需LKB1的参与 | 第55-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第5章 AMPK活化增加肿瘤细胞对依托泊苷的药物敏感性 | 第58-65页 |
| 5.1 背景 | 第58页 |
| 5.2 材料与方法 | 第58-60页 |
| 5.2.1 细胞株 | 第58页 |
| 5.2.2 质粒载体 | 第58-59页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第59页 |
| 5.2.4 细胞培养 | 第59页 |
| 5.2.5 细胞转染 | 第59页 |
| 5.2.6 构建AMPK DN细胞株 | 第59页 |
| 5.2.7 流式细胞仪检测细胞凋亡率 | 第59-60页 |
| 5.2.8 Western blot检测凋亡相关蛋白 | 第60页 |
| 5.2.9 统计方法 | 第60页 |
| 5.3 实验结果 | 第60-63页 |
| 5.3.1 激活AMPK增加肿瘤细胞对抗癌药物（依托泊苷）的凋亡易感性 | 第60-61页 |
| 5.3.2 AMPK活化对caspase 3 和PARP活化的影响 | 第61-63页 |
| 5.4 讨论 | 第63-65页 |
| 第6章 LKB1和MLK3对AMPK的调节作用 | 第65-74页 |
| 6.1 背景 | 第65-66页 |
| 6.2 材料与方法 | 第66-68页 |
| 6.2.1 细胞株 | 第66页 |
| 6.2.2 主要试剂 | 第66-67页 |
| 6.2.3 细胞培养 | 第67页 |
| 6.2.4 A549-LKB1稳定细胞的构建 | 第67页 |
| 6.2.5 Western blot | 第67页 |
| 6.2.6 体外激酶实验 | 第67-68页 |
| 6.2.7 分析与MLK3相互作用的蛋白 | 第68页 |
| 6.3 实验结果 | 第68-72页 |
| 6.3.1 山梨醇诱导的AMPK和JNK/MAPK活化 | 第68-69页 |
| 6.3.2 山梨醇以LKB1非依赖性的方式激活AMPK | 第69-70页 |
| 6.3.3 MLK3对AMPK的磷酸化 | 第70-71页 |
| 6.3.4 MLK3与AMPKα1 亚单位紧密结合 | 第71-72页 |
| 6.4 讨论 | 第72-74页 |
| 第7章 结论与展望 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第83-84页 |
| 综述 | 第84-118页 |
| LKB1/AMPK在抗肿瘤治疗中的作用 | 第84-103页 |
| 参考文献 | 第96-103页 |
| SMAD7: a timer of tumor progression targeting TGF-β signaling | 第103-118页 |
| References | 第112-118页 |
