| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-46页 |
| 1.1 植物分生组织 | 第14-19页 |
| 1.1.1 植物分生组织的发育 | 第14-18页 |
| 1.1.1.1 植物茎端分生组织的发育 | 第17页 |
| 1.1.1.2 植物根端分生组织的发育 | 第17-18页 |
| 1.1.2 植物分生组织与植物生长发育 | 第18-19页 |
| 1.2 茎端分生组织的结构 | 第19-24页 |
| 1.2.1 茎端分生组织的细胞学分区 | 第20-21页 |
| 1.2.2 茎端分生组织的胚性起始 | 第21-22页 |
| 1.2.3 茎端分生组织活性的维持 | 第22-24页 |
| 1.3 茎端分生组织干细胞 | 第24-32页 |
| 1.3.1 茎端分生组织干细胞的细胞学特征 | 第25-26页 |
| 1.3.2 茎端分生组织干细胞的起始与终止 | 第26-30页 |
| 1.3.3 茎端分生组织干细胞在侧生器官分化中的作用 | 第30-32页 |
| 1.4 茎端分生组织干细胞的分子遗传调控 | 第32-43页 |
| 1.4.1 WUS基因调控茎端干细胞的活性 | 第36-37页 |
| 1.4.2 CLV基因调控茎端干细胞的活性 | 第37-39页 |
| 1.4.3 调控茎端干细胞形成和维持的CLV-WUS反馈调节机制 | 第39-40页 |
| 1.4.4 WUS与STM基因在调控茎端干细胞发育中共同起作用 | 第40-43页 |
| 1.5 植物干细胞与动物干细胞的区别 | 第43-44页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第44-46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-69页 |
| 2.1 材料 | 第46-47页 |
| 2.1.1 植物材料及生长条件 | 第46页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第46页 |
| 2.1.3 酶、生化试剂及仪器 | 第46-47页 |
| 2.1.4 常用缓冲液及培养基的配制 | 第47页 |
| 2.2 实验方法 | 第47-69页 |
| 2.2.1 拟南芥的种植方法 | 第47-48页 |
| 2.2.2 植物基因组的提取及纯化 | 第48-49页 |
| 2.2.3 PCR扩增实验 | 第49页 |
| 2.2.4 植物总RNA的提取 | 第49-50页 |
| 2.2.5 反转录cDNA第一链的合成 | 第50-51页 |
| 2.2.6 实时定量PCR分析 | 第51-52页 |
| 2.2.7 根癌农杆菌菌株GV3101感受态细胞的制备与细胞转化 | 第52-53页 |
| 2.2.7.1 农杆菌菌株感受态细胞的制备 | 第52页 |
| 2.7.7.2 电转化法转化农杆菌细胞 | 第52-53页 |
| 2.2.8 拟南芥的转化 | 第53页 |
| 2.2.9 表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 2.2.10 蛋白表达纯化 | 第54-56页 |
| 2.2.10.1 His-STM蛋白的表达纯化 | 第54-56页 |
| 2.2.10.2 GST-WUS蛋白的表达纯化 | 第56页 |
| 2.2.11 酵母单杂交实验 | 第56-58页 |
| 2.2.11.1 试剂配制 | 第56-57页 |
| 2.2.11.2 酵母单杂交表达载体构建 | 第57页 |
| 2.2.11.3 酵母转化 | 第57-58页 |
| 2.2.12 酵母双杂交实验 | 第58页 |
| 2.2.13 Pull-Down实验 | 第58页 |
| 2.2.14 凝胶迁移率实验EMSA | 第58-60页 |
| 2.2.14.1 生物素标记EMSA探针的制备 | 第59页 |
| 2.2.14.2 6%非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第59页 |
| 2.2.14.3 DNA探针与蛋白质结合 | 第59页 |
| 2.2.14.4 电泳和转膜 | 第59-60页 |
| 2.2.15 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第60-63页 |
| 2.2.15.1 染色质交联 | 第60-62页 |
| 2.2.15.2 ChIP实验过程中所用试剂配方 | 第62页 |
| 2.2.15.3 染色质免疫共沉淀中所用引物 | 第62-63页 |
| 2.2.16 免疫共沉淀(Co-IP) | 第63-64页 |
| 2.2.16.1 免疫共沉淀步骤 | 第63页 |
| 2.2.16.2 免疫共沉淀实验中所用试剂配方 | 第63-64页 |
| 2.2.17 共聚焦显微镜观察和图像处理 | 第64页 |
| 2.2.18 基因枪轰击拟南芥茎端实验 | 第64-66页 |
| 2.2.18.1 基因枪微弹的准备步骤 | 第65页 |
| 2.2.18.2 基因枪转化 | 第65-66页 |
| 2.2.19 原位杂交分析 | 第66-69页 |
| 2.2.19.1 材料的固定 | 第66页 |
| 2.2.19.2 材料的包埋 | 第66页 |
| 2.2.19.3 切片 | 第66-67页 |
| 2.2.19.4 脱蜡、消化、乙酰化和杂交 | 第67-68页 |
| 2.2.19.5 洗片 | 第68页 |
| 2.2.19.6 检测 | 第68-69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-85页 |
| 3.1 免疫共沉淀结合质谱分析寻找WUS蛋白的互作因子 | 第69-71页 |
| 3.1.1 pWUS::WUS-3GFP转基因植株的鉴定 | 第69-70页 |
| 3.1.2 免疫共沉淀结合质谱实验过程 | 第70-71页 |
| 3.2 WUS蛋白与STM蛋白存在直接的相互作用 | 第71-73页 |
| 3.2.1 酵母双杂交实验证实STM蛋白与WUS蛋白之间存在相互作用 | 第71-72页 |
| 3.2.2 Pull-Down实验证实STM蛋白与WUS蛋白存在相互作用 | 第72页 |
| 3.2.3 免疫共沉淀结果证实STM蛋白与WUS蛋白在拟南芥体内存在直接相互作用 | 第72-73页 |
| 3.3 STM基因与WUS基因在拟南芥不同发育时期的表达模式 | 第73-75页 |
| 3.4 STM蛋白对CLV3基因的表达调控 | 第75-76页 |
| 3.5 STM蛋白直接调控CLV3基因的转录 | 第76-80页 |
| 3.5.1 ChIP实验证实在拟南芥体内存在STM蛋白对CLV3基因的调控作用 | 第76-78页 |
| 3.5.2 EMSA实验显示STM蛋白可以直接结合到CLV3基因的启动子上 | 第78页 |
| 3.5.3 酵母单杂交实验证实STM蛋白与CLV3基因之间存在直接的相互作用 | 第78-79页 |
| 3.5.4 瞬时转化实验显示STM蛋白直接激活CLV3基因的表达 | 第79-80页 |
| 3.6 STM蛋白与WUS蛋白共同参与了对CLV3基因的表达调控 | 第80-83页 |
| 3.6.1 STM蛋白与WUS蛋白可以同时结合到CLV3基因的启动子上 | 第80-81页 |
| 3.6.2 STM蛋白与WUS蛋白共同激活CLV3基因的表达 | 第81页 |
| 3.6.3 CLV3基因的正常表达受到STM与WUS蛋白共同调控 | 第81-83页 |
| 3.7 CLV3与STM基因之间存在反馈调节机制 | 第83-85页 |
| 4 讨论 | 第85-89页 |
| 5 结论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第104页 |
