| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 温度对微生物的影响 | 第10-11页 |
| 1.2 微生物对高温环境的适应 | 第11-13页 |
| 1.2.1 微生物应对高温的策略 | 第11-12页 |
| 1.2.2 高温胁迫下热休克蛋白的保护作用 | 第12-13页 |
| 1.3 温度对微生物利用纤维素过程的影响 | 第13-14页 |
| 1.3.1 微生物的碳源 | 第13页 |
| 1.3.2 温度对纤维素获取的影响 | 第13-14页 |
| 1.4 纤维素酶 | 第14-18页 |
| 1.4.1 糖苷水解酶家族简介 | 第14页 |
| 1.4.2 纤维素的组成和利用 | 第14-15页 |
| 1.4.3 纤维素酶的分类及其功能 | 第15-16页 |
| 1.4.4 纤维素酶的来源和研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4.5 微生物利用纤维素作为碳源的策略 | 第17-18页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 1.5.1 立体依据 | 第18-20页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第20页 |
| 1.7 研究内容与技术路线 | 第20-22页 |
| 1.7.1 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.7.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 T.rubra YIM 77501~T中两个新颖糖苷水解酶基因的克隆表达 | 第22-59页 |
| 2.1 实验材料及使用仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂和仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-36页 |
| 2.2.1 全基因组测序 | 第23页 |
| 2.2.2 基因组数据分析 | 第23-24页 |
| 2.2.3 目的基因的扩增和克隆 | 第24-27页 |
| 2.2.4 基因的异源表达和蛋白纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.5 酶学性质的测定 | 第28-36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-57页 |
| 2.3.1 全基因组分析结果 | 第36-41页 |
| 2.3.2 内切葡聚糖苷酶ThrCel5A | 第41-48页 |
| 2.3.3 木聚糖酶TrXyn10 | 第48-57页 |
| 2.4 本章小结与讨论 | 第57-59页 |
| 第三章 T.rubra YIM 77501~T转录组分析及上调表达纤维素酶基因的功能验证 | 第59-93页 |
| 3.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 3.1.1 转录组样品准备 | 第59-60页 |
| 3.2 实验方法 | 第60-68页 |
| 3.2.1 转录组测序和数据分析 | 第60-61页 |
| 3.2.2 基因克隆、表达和纤维素酶纯化 | 第61-64页 |
| 3.2.3 酶学性质实验 | 第64-68页 |
| 3.3 实验结果 | 第68-88页 |
| 3.3.1 菌株T.rubra YIM 77501~T的生长曲线 | 第68-69页 |
| 3.3.2 转录组测序结果分析 | 第69-80页 |
| 3.3.3 上调表达纤维素酶基因的克隆、表达结果 | 第80-82页 |
| 3.3.4 酶学性质的测定及分析 | 第82-88页 |
| 3.4 小结和讨论 | 第88-93页 |
| 第四章 T.rubra YIM 77501~T高温耐受适应机制 | 第93-134页 |
| 4.1 实验材料 | 第93页 |
| 4.2 实验方法 | 第93-99页 |
| 4.2.1 PCR获得菌株T.rubra YIM 77501~T的HSPs基因 | 第93-95页 |
| 4.2.2 载体pET28a-△lac operator的构建 | 第95-99页 |
| 4.2.3 目的基因在大肠杆菌中组成型表达 | 第99页 |
| 4.3 实验结果 | 第99-129页 |
| 4.3.1 T.rubra YIM77501~T热体克蛋白的分析 | 第99-101页 |
| 4.3.2 DnaK的分析 | 第101-106页 |
| 4.3.3 DnaK的克隆和表达 | 第106-107页 |
| 4.3.4 DnaK和N-DnaK对E.coli BL21 DE3耐热性的影响 | 第107-113页 |
| 4.3.5 N-DnaK的结构分析 | 第113-116页 |
| 4.3.6 N-DnaK的ATP结合位点分析 | 第116-117页 |
| 4.3.7 N-DnaK的ATP结合位点的突变体 | 第117-127页 |
| 4.3.8 细胞ATPase活性测定 | 第127-129页 |
| 4.4 小结和讨论 | 第129-134页 |
| 第五章 总结、创新点及展望 | 第134-136页 |
| 5.1 结论 | 第134-135页 |
| 5.2 创新点 | 第135页 |
| 5.3 展望 | 第135-136页 |
| 附录 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-146页 |
| 博士期间成果 | 第146-147页 |
| 致谢 | 第147页 |
