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氨基酸介导的TORC1信号通路的研究

中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
前言第10-14页
实验材料与方法第14-26页
    1. 实验材料第14-18页
        1.1 酵母菌株和细胞第14页
        1.2 质粒第14-15页
        1.3 培养基第15-16页
        1.4 实验试剂第16-17页
        1.5 主要仪器第17-18页
    2. 实验方法第18-26页
        2.1 酵母TORC1活性检测第18-19页
        2.2 酵母的质粒转染第19-20页
        2.3 酵母菌液的点板生长实验第20页
        2.4 加大特定氨基酸浓度条件下Whi2-TAP的表达量测定第20-21页
        2.5 酵母的蛋白质印迹第21-23页
        2.6 细胞传代第23页
        2.7 冻存哺乳动物细胞第23-24页
        2.8 哺乳动物细胞的加入氨基酸刺激处理和细胞裂解第24页
        2.9 哺乳动物细胞的蛋白质印迹(参照2.5)第24页
        2.10 转录组测序第24-26页
实验结果第26-51页
    1. 低浓度亮氨酸抑制野生型酵母的生长第26-27页
    2. 低浓度亮氨酸并非限制WT生长的唯一因素第27-28页
    3. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸会限制WT的生长第28-31页
    4. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸对WT生长的抑制呈现浓度依赖性第31页
    5. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸不是通过引起细胞死亡而导致WT生长降低第31-33页
    6. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸通过抑制TORC1的活性来抑制WT的生长第33-34页
    7. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸可以诱导自噬第34-35页
    8. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸无法抑制可自身合成亮氨酸的酵母菌株中TORC活性第35-38页
    9. 异亮氨酸,苯丙氨酸和酪氨酸对TORC1活性的抑制作用可以被亮氨酸消除第38-39页
    10. 酪氨酸对TORC1活性的抑制与WHI2基因有关第39-40页
    11. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸能特异性提高WHI2蛋白的表达量第40-41页
    12. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸对TORC1活性的抑制与低浓度亮氨酸条件下的抑制十分相似第41-45页
    13. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸不是对所有的哺乳动物细胞系的TORC1活性均有影响第45-47页
    14. 酪氨酸在转录水平上对WT酵母菌株基因表达的影响第47-51页
讨论第51-56页
    1. 过量异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸可抑制TORC1活性第51-52页
    2. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸抑制TORC1活性的可能机制第52-56页
结论第56-57页
参考文献第57-61页
文献综述 MTORC1的多种氨基酸传感器研究进展第61-72页
    参考文献第68-72页
英文缩略词表第72-74页
攻读学位期间发表的论文第74-75页
致谢第75页

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