中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
前言 | 第10-14页 |
实验材料与方法 | 第14-26页 |
1. 实验材料 | 第14-18页 |
1.1 酵母菌株和细胞 | 第14页 |
1.2 质粒 | 第14-15页 |
1.3 培养基 | 第15-16页 |
1.4 实验试剂 | 第16-17页 |
1.5 主要仪器 | 第17-18页 |
2. 实验方法 | 第18-26页 |
2.1 酵母TORC1活性检测 | 第18-19页 |
2.2 酵母的质粒转染 | 第19-20页 |
2.3 酵母菌液的点板生长实验 | 第20页 |
2.4 加大特定氨基酸浓度条件下Whi2-TAP的表达量测定 | 第20-21页 |
2.5 酵母的蛋白质印迹 | 第21-23页 |
2.6 细胞传代 | 第23页 |
2.7 冻存哺乳动物细胞 | 第23-24页 |
2.8 哺乳动物细胞的加入氨基酸刺激处理和细胞裂解 | 第24页 |
2.9 哺乳动物细胞的蛋白质印迹(参照2.5) | 第24页 |
2.10 转录组测序 | 第24-26页 |
实验结果 | 第26-51页 |
1. 低浓度亮氨酸抑制野生型酵母的生长 | 第26-27页 |
2. 低浓度亮氨酸并非限制WT生长的唯一因素 | 第27-28页 |
3. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸会限制WT的生长 | 第28-31页 |
4. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸对WT生长的抑制呈现浓度依赖性 | 第31页 |
5. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸不是通过引起细胞死亡而导致WT生长降低 | 第31-33页 |
6. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸通过抑制TORC1的活性来抑制WT的生长 | 第33-34页 |
7. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸可以诱导自噬 | 第34-35页 |
8. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸无法抑制可自身合成亮氨酸的酵母菌株中TORC活性 | 第35-38页 |
9. 异亮氨酸,苯丙氨酸和酪氨酸对TORC1活性的抑制作用可以被亮氨酸消除 | 第38-39页 |
10. 酪氨酸对TORC1活性的抑制与WHI2基因有关 | 第39-40页 |
11. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸能特异性提高WHI2蛋白的表达量 | 第40-41页 |
12. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸对TORC1活性的抑制与低浓度亮氨酸条件下的抑制十分相似 | 第41-45页 |
13. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸不是对所有的哺乳动物细胞系的TORC1活性均有影响 | 第45-47页 |
14. 酪氨酸在转录水平上对WT酵母菌株基因表达的影响 | 第47-51页 |
讨论 | 第51-56页 |
1. 过量异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸可抑制TORC1活性 | 第51-52页 |
2. 异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸抑制TORC1活性的可能机制 | 第52-56页 |
结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-61页 |
文献综述 MTORC1的多种氨基酸传感器研究进展 | 第61-72页 |
参考文献 | 第68-72页 |
英文缩略词表 | 第72-74页 |
攻读学位期间发表的论文 | 第74-75页 |
致谢 | 第75页 |