| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1 核盘菌的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1 核盘菌及其危害 | 第12-13页 |
| 1.2 作物菌核病的防治 | 第13-14页 |
| 2 盾壳霉的研究进展 | 第14-16页 |
| 2.1 盾壳霉的生物学特性 | 第14-15页 |
| 2.2 盾壳霉的生态学特性 | 第15-16页 |
| 2.3 盾壳霉的分子生物学研究 | 第16页 |
| 3 逆转录转座子研究进展 | 第16-18页 |
| 3.1 逆转录转座子的类型和基本结构 | 第16-17页 |
| 3.2 逆转录转座子和寄主的相互作用 | 第17-18页 |
| 4 本项研究的意义 | 第18-19页 |
| 第二章 盾壳霉T-DNA插入突变体ZS-1N23006的生物学性状的测定 | 第19-26页 |
| 1 材料与方法 | 第19-21页 |
| 1.1 材料 | 第19页 |
| 1.1.1 菌株 | 第19页 |
| 1.1.2 培养基 | 第19页 |
| 1.2 方法 | 第19-21页 |
| 1.2.1 突变体ZS-1N23006的菌丝生长速度及形态特征研究 | 第19-20页 |
| 1.2.2 突变体菌株ZS-1N23006在PDA培养基上产抗生物质能力测定 | 第20页 |
| 1.2.3 突变体ZS-1N23006寄生致腐核盘菌菌核能力的测定 | 第20页 |
| 1.2.4 突变体ZS-1N23006对环境pH值敏感性测定 | 第20-21页 |
| 1.2.5 盾壳霉菌株ZS-1和突变体ZS-1N23006对峙培养的生物学测定 | 第21页 |
| 1.2.6 数据统计分析 | 第21页 |
| 2 结果与分析 | 第21-25页 |
| 2.1 突变体ZS-1N23006菌株的形态特征观察及生长速度的比较 | 第21-22页 |
| 2.2 突变体ZS-1N23006产抗生物质能力研究 | 第22-23页 |
| 2.3 突变体ZS-1N23006具有寄生致腐菌核能力 | 第23-24页 |
| 2.4 突变体ZS-1N23006对环境pH值的敏感性 | 第24页 |
| 2.5 ZS-1N23006与ZS-1对峙培养过程中恢复了产孢 | 第24-25页 |
| 3 结论和讨论 | 第25-26页 |
| 3.1 结论 | 第25页 |
| 3.2 讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 盾壳霉T-DNA插入突变体ZS-1N23006关键基因克隆 | 第26-46页 |
| 1 材料与方法 | 第26-36页 |
| 1.1 材料 | 第26-28页 |
| 1.1.1 菌株 | 第26页 |
| 1.1.2 培养基、载体及抗生素 | 第26页 |
| 1.1.3 质粒抽提用溶液 | 第26-27页 |
| 1.1.4 Southern杂交用溶液及试剂 | 第27页 |
| 1.1.5 其它溶液及试剂 | 第27页 |
| 1.1.6 限制性内切酶及其它酶类、试剂盒及其它试剂 | 第27-28页 |
| 1.1.7 引物 | 第28页 |
| 1.2 方法 | 第28-36页 |
| 1.2.1 菌丝培养(用于基因组DNA的提取) | 第28页 |
| 1.2.2 基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 1.2.3 Southern杂交分析突变体中T-DNA的插入位点数 | 第29-30页 |
| 1.2.3.1 酶切、电泳、转膜及固定 | 第29页 |
| 1.2.3.2 预杂交 | 第29页 |
| 1.2.3.3 探针标记及杂交 | 第29-30页 |
| 1.2.3.4 洗膜及压片 | 第30页 |
| 1.2.4 反向PCR克隆ZS-1N23006T-DNA插入位点侧翼序列 | 第30-31页 |
| 1.2.4.1 ZS-1N23006基因组DNA酶切 | 第30-31页 |
| 1.2.4.2 连接 | 第31页 |
| 1.2.4.3 PCR扩增 | 第31页 |
| 1.2.5 目的片段的回收及纯化 | 第31页 |
| 1.2.6 回收产物与克隆载体连接 | 第31页 |
| 1.2.7 利用大肠杆菌感受态细胞转化连接产物 | 第31-33页 |
| 1.2.7.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31-33页 |
| 1.2.7.2 热击转化 | 第33页 |
| 1.2.8 重组质粒的提取及鉴定 | 第33页 |
| 1.2.8.1 重组质粒的提取 | 第33页 |
| 1.2.8.2 重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| 1.2.9 克隆序列分析 | 第33-34页 |
| 1.2.10 目的基因片段的更多序列的克隆 | 第34-35页 |
| 1.2.10.1 ZS-1菌株DNA的提取 | 第34页 |
| 1.2.10.2 通过I-PCR获得更多基因序列 | 第34-35页 |
| 1.2.10.2.1 引物设计 | 第34页 |
| 1.2.10.2.2 酶切 | 第34页 |
| 1.2.10.2.3 连接 | 第34页 |
| 1.2.10.2.4 PCR扩增 | 第34-35页 |
| 1.2.10.3 目的片段的回收、连接和鉴定 | 第35页 |
| 1.2.10.4 序列拼接 | 第35页 |
| 1.2.11 目的DNA序列的进一步克隆 | 第35-36页 |
| 1.2.11.1 出发菌株DNA的提取 | 第35页 |
| 1.2.11.2 通过I-PCR进一步克隆目的基因 | 第35-36页 |
| 1.2.11.2.1 引物设计 | 第35页 |
| 1.2.11.2.2 酶切 | 第35页 |
| 1.2.11.2.3 连接 | 第35页 |
| 1.2.11.2.4 PCR扩增 | 第35-36页 |
| 1.2.11.3 目的片段的回收、连接和鉴定 | 第36页 |
| 1.2.11.4 序列拼接及分析 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-44页 |
| 2.1 Southern杂交分析突变体ZS-1N23006中T-DNA插入位点数 | 第36-37页 |
| 2.2 反向PCR获得T-DNA插入位点侧端基因组DNA序列 | 第37-41页 |
| 2.3 突变体ZS-1N23006菌株T-DNA插入破坏的基因信息分析 | 第41-44页 |
| 3 结论和讨论 | 第44-46页 |
| 3.1 结论 | 第44页 |
| 3.2 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 RT-PCR分析盾壳霉T-DNA插入突变体ZS-1N23006关键基因的表达 | 第46-50页 |
| 1 材料和方法 | 第46-47页 |
| 1.1 材料:同前所述 | 第46页 |
| 1.2 方法 | 第46-47页 |
| 1.2.1 RT-PCR验证ZS-1N23006中PHOX和RT基因的表达 | 第46-47页 |
| 1.2.1.1 引物设计 | 第46页 |
| 1.2.1.2 材料的准备 | 第46页 |
| 1.2.1.3 ZS-1和ZS-1N23006菌株RNA的提取 | 第46-47页 |
| 1.2.1.4 通过逆转录试剂盒获得cDNA | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-49页 |
| 2.1 总RNA的提取 | 第47-48页 |
| 2.2 RT-PCR检测逆转录酶(RT)和磷酸水解酶基因(Phos)的表达 | 第48-49页 |
| 3 结论和讨论 | 第49-50页 |
| 3.1 结论 | 第49页 |
| 3.2 讨论 | 第49-50页 |
| 结论与展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
