| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-18页 |
| 1.1 口蹄疫概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 FMDV结构特点 | 第12-13页 |
| 1.2 口蹄疫表位疫苗研究进展 | 第13页 |
| 1.3 单域抗体的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3.1 单域抗体结构特点 | 第14-15页 |
| 1.3.2 单域抗体在FMD方面的进展 | 第15页 |
| 1.4 树突状细胞表面受体 | 第15-16页 |
| 1.4.1 Clec8A受体 | 第15-16页 |
| 1.4.2 趋化因子受体XCR1及其配体XCL1 | 第16页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第16-18页 |
| 第二章 树突状细胞表面受体Clec8A与XCR1单域抗体的筛选 | 第18-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 细胞来源 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 酵母文库的构建 | 第19页 |
| 2.2.2 猪Clec8A受体胞外区基因和XCR1基因原核表达 | 第19-22页 |
| 2.2.3 Clec8A抗原蛋白与XCR1蛋白的生物素标记 | 第22页 |
| 2.2.4 酵母文库的复苏 | 第22-23页 |
| 2.2.5 酵母文库的筛选 | 第23-24页 |
| 2.2.6 单域抗体基因的克隆 | 第24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-30页 |
| 2.3.1 猪Clec8A与XCR1基因克隆 | 第24-25页 |
| 2.3.2 猪Clec8A胞外区与XCR1原核表达与纯化 | 第25页 |
| 2.3.3 Clec8A抗原与XCR1的生物素标记鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.4 酵母菌最佳培养时间与最适诱导时间的确定 | 第26-27页 |
| 2.3.5 酵母文库筛选结果的流式细胞术检测 | 第27-28页 |
| 2.3.6 单域抗体基因的PCR鉴定 | 第28-30页 |
| 2.4 小结讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 XCL融合A型口蹄疫表位蛋白疫苗的制备 | 第31-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第31页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第31页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 3.2.1 多表位免疫原的设计与合成 | 第31页 |
| 3.2.2 三种复合表位蛋白原核表达与纯化 | 第31-32页 |
| 3.2.3 Western Blotting检测重组蛋白免疫原性 | 第32页 |
| 3.2.4 抗原疫苗的制备 | 第32-33页 |
| 3.3 实验结果 | 第33-34页 |
| 3.3.1 重组表位蛋白包含的各表位 | 第33页 |
| 3.3.2 重组蛋白原核表达的SDS-PAGE鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.3 重组蛋白免疫原性Western Blotting鉴定 | 第34页 |
| 3.4 小结讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 表位疫苗动物免疫效果评价 | 第36-47页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第36页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第36-37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-40页 |
| 4.2.1 实验动物分组与免疫 | 第37页 |
| 4.2.3 动物采血 | 第37页 |
| 4.2.4 抗A型口蹄疫病毒特异性抗体检测 | 第37页 |
| 4.2.5 中和抗体水平检测 | 第37-38页 |
| 4.2.6 外周血CD4~+、CD8~+淋巴细胞亚群检测 | 第38-39页 |
| 4.2.7 淋巴细胞体外增殖 | 第39页 |
| 4.2.8 血清中细胞因子IFN-γ含量测定 | 第39页 |
| 4.2.9 3ABC非结构蛋白抗体 | 第39-40页 |
| 4.3 实验结果 | 第40-45页 |
| 4.3.1 液相阻断ELISA检测特异性抗体效价 | 第40页 |
| 4.3.2 微量中和试验检测中和抗体效价 | 第40-41页 |
| 4.3.3 流式细胞术检测CD4~+、CD8~+淋巴细胞亚群比例 | 第41-42页 |
| 4.3.4 流式细胞术检测淋巴细胞增殖结果 | 第42-43页 |
| 4.3.5 间接ELISA检测血清中IFN-γ 水平 | 第43-44页 |
| 4.3.6 3ABC非结构蛋白抗体 | 第44页 |
| 4.3.7 攻毒后动物保护率 | 第44-45页 |
| 4.4 小结讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 附录 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
