| 中文摘要 | 第13-14页 |
| 英文摘要 | 第14页 |
| 第一章 前言 | 第15-20页 |
| 1.1 关于醌酶和PQQ | 第15-16页 |
| 1.2 关于山梨糖脱氢酶 | 第16-17页 |
| 1.3 关于醌酶-糖代谢效应 | 第17-18页 |
| 1.4 立题背景和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 山梨糖脱氢酶表达对宿主葡萄糖代谢的影响 | 第20-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21页 |
| 2.2.1 添加葡萄糖对携带sdh的大肠杆菌生长代谢及SDH活性影响 | 第21页 |
| 2.2.2 添加其他糖类对携带sdh的大肠杆菌生长代谢及SDH活性影响 | 第21页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第21-26页 |
| 2.3.1 葡萄糖浓度(C_(Glc))对携带sdh的大肠杆菌生长代谢及SDH活性影响 | 第21-23页 |
| 2.3.2 培养温度对携带sdh的大肠杆菌生长代谢及SDH活性影响 | 第23-25页 |
| 2.3.3 比较3株大肠杆菌SDH-糖代谢效应的差异 | 第25-26页 |
| 2.3.4 其他糖类对携带sdh的大肠杆菌生长代谢及SDH活性影响 | 第26页 |
| 2.4 小结 | 第26-28页 |
| 第三章 醌酶-糖代谢效应的发现 | 第28-33页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-30页 |
| 3.2.1 肌醇脱氢酶表达载体构建及鉴定 | 第29页 |
| 3.2.2 肌醇脱氢酶在大肠杆菌的表达及活性检测 | 第29页 |
| 3.2.3 添加葡萄糖对携带idh大肠杆菌生长代谢及IDH活性影响 | 第29页 |
| 3.2.4 添加葡萄糖对携带sndh大肠杆菌生长代谢及SNDH活性影响 | 第29-30页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第30-32页 |
| 3.3.1 pUC19-idh载体构建 | 第30-31页 |
| 3.3.2 IDH在大肠杆菌的表达及活性检测 | 第31页 |
| 3.3.3 添加葡萄糖对携带idh大肠杆菌生长代谢及IDH活性影响 | 第31页 |
| 3.3.4 添加葡萄糖对携带sndh大肠杆菌生长代谢及SNDH活性的影响 | 第31-32页 |
| 3.4 小结 | 第32-33页 |
| 第四章 其他宿主菌中醌酶-糖代谢效应的考察 | 第33-47页 |
| 第一节 山梨糖脱氢酶在葡糖杆菌的表达 | 第33-38页 |
| 4.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 4.2 实验方法 | 第34-35页 |
| 4.2.1 621H抗生素敏感性实验研究 | 第34页 |
| 4.2.2 大肠杆菌-葡糖杆菌穿梭载体构建 | 第34页 |
| 4.2.3 接合转移及接合子筛选 | 第34页 |
| 4.2.4 His标签融合SDH蛋白在葡糖杆菌的表达及活性检测 | 第34-35页 |
| 4.2.5 His标签融合SDH蛋白纯化 | 第35页 |
| 4.2.6 SDS-PAGE检测SDH-His表达 | 第35页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第35-37页 |
| 4.3.1 621H抗生素敏感性实验研究 | 第35-36页 |
| 4.3.2 pEXGOX-A-sdhh载体构建 | 第36页 |
| 4.3.3 SDH-His在葡糖杆菌的表达及活性检测 | 第36-37页 |
| 4.4 小结 | 第37-38页 |
| 第二节 山梨糖脱氢酶在福氏志贺氏菌表达 | 第38-40页 |
| 4.1 实验材料 | 第38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 4.2.1 山梨糖脱氢酶在志贺菌的表达及活性检测 | 第38-39页 |
| 4.2.2 添加葡萄糖对携带sdh志贺菌生长代谢及SDH活性影响 | 第39页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第39页 |
| 4.3.1 添加葡萄糖对携带sdh志贺菌生长及SDH活性影响 | 第39页 |
| 4.4 小结 | 第39-40页 |
| 第三节 山梨糖脱氢酶在乙酸钙不动杆菌的表达 | 第40-47页 |
| 4.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 4.2.1 Y2004形态及生长曲线考察 | 第41页 |
| 4.2.2 Y2004抗生素敏感性实验研究 | 第41页 |
| 4.2.3 大肠杆菌-乙酸钙不动杆菌穿梭载体构建 | 第41-42页 |
| 4.2.4 接合转移及接合子筛选 | 第42页 |
| 4.2.5 SDH在乙酸钙不动杆菌的表达及活性检测 | 第42页 |
| 4.2.6 分析SDH体外反应产物 | 第42页 |
| 4.2.7 分析SDH在乙酸钙不动杆菌体内反应产物 | 第42页 |
| 4.2.8 葡萄糖对携带sdh乙酸钙不动杆菌生长及SDH活性影响 | 第42页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第42-46页 |
| 4.3.1 Y2004形态、生长曲线、抗生素谱考察 | 第42-44页 |
| 4.3.2 pBBR1MCS-2-ORI-sdh载体构建及鉴定 | 第44页 |
| 4.3.3 接合转移和接合子鉴定 | 第44页 |
| 4.3.4 SDH在乙酸钙不动杆菌的表达及活性检测 | 第44-45页 |
| 4.3.5 SDH对山梨糖转化体外实验 | 第45页 |
| 4.3.6 分析SDH在乙酸钙不动杆菌体内反应产物 | 第45-46页 |
| 4.3.7 葡萄糖对携带sdh乙酸钙不动杆菌生长代谢及SDH活性影响 | 第46页 |
| 4.4 小结 | 第46-47页 |
| 第五章 醌酶-糖代谢效应发生机制初探 | 第47-73页 |
| 第一节 代谢产物毒性分析 | 第47-49页 |
| 5.1 实验材料 | 第47页 |
| 5.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 5.2.1 毒性物质的考察 | 第47-48页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第48页 |
| 5.3.1 毒性物质考察结果 | 第48页 |
| 5.4 小结 | 第48-49页 |
| 第二节 转录水平分析 | 第49-52页 |
| 5.1 实验材料 | 第49页 |
| 5.2 实验方法 | 第49页 |
| 5.2.1 基因芯片样品制作 | 第49页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第49-51页 |
| 5.3.1 样品质检报告 | 第49-50页 |
| 5.3.2 样品基因表达差异比较分析 | 第50-51页 |
| 5.4 小结 | 第51-52页 |
| 第三节 比较蛋白质组学研究 | 第52-58页 |
| 5.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-54页 |
| 5.2.1 全菌蛋白样品制备 | 第53页 |
| 5.2.2 蛋白质定量试剂盒定量 | 第53-54页 |
| 5.2.3 等电聚焦 | 第54页 |
| 5.2.4 SDS-PAGE电泳 | 第54页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第54-57页 |
| 5.3.1 大肠杆菌及携带sdh大肠杆菌全细胞蛋白表达谱 | 第54-55页 |
| 5.3.2 葡萄糖对大肠杆菌及携带sdh大肠杆菌全细胞蛋白表达谱影响 | 第55-57页 |
| 5.4 小结 | 第57-58页 |
| 第四节 醌酶的表达分析 | 第58-63页 |
| 5.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 5.2 实验方法 | 第59页 |
| 5.2.1 融合His标签的山梨糖脱氢酶表达载体构建 | 第59页 |
| 5.2.2 添加葡萄糖对SDH活性影响 | 第59页 |
| 5.2.3 His标签融合蛋白的纯化 | 第59页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第59-62页 |
| 5.3.1 pUC19-sdh载体构建及SDH-His表达 | 第59-61页 |
| 5.3.2 添加葡萄糖对SDH活性影响 | 第61-62页 |
| 5.4 小结 | 第62-63页 |
| 第五节 阻断葡萄糖磷酸化途径 | 第63-73页 |
| 5.1 实验材料 | 第63-64页 |
| 5.2 实验方法 | 第64-67页 |
| 5.2.1 线性打靶DNA片段的制备 | 第64-66页 |
| 5.2.2 目的基因的缺失 | 第66页 |
| 5.2.3 缺陷株生长曲线测定 | 第66页 |
| 5.2.4 山梨糖脱氢酶在大肠杆菌及缺陷株的表达及活性检测 | 第66页 |
| 5.2.5 葡萄糖对携带sdh基因的缺陷株生长及SDH活性的影响 | 第66-67页 |
| 5.2.6 其他糖类对携带sdh基因的缺陷株生长及SDH活性的影响 | 第67页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第67-72页 |
| 5.3.1 大肠杆菌ptsG基因缺陷株构建与鉴定 | 第67-69页 |
| 5.3.2 大肠杆菌ptsM基因缺陷株的构建与鉴定 | 第69-70页 |
| 5.3.3 测定野生株与缺陷株在LB、LBG培养基中的生长曲线 | 第70-71页 |
| 5.3.4 葡萄糖对携带sdh的大肠杆菌缺陷株生长及SDH活性影响 | 第71页 |
| 5.3.5 各种糖类对携带sdh的DH5α△ptsG生长及SDH活性影响 | 第71-72页 |
| 5.4 小结 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 发表文章 | 第74-82页 |
| 附图 | 第82-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
