| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 文献综述 | 第7-12页 |
| 1.1 昆虫天然免疫研究概述 | 第7页 |
| 1.2 丝氨酸蛋白酶抑制剂研究概述 | 第7-9页 |
| 1.2.1 丝氨酸蛋白酶抑制剂的分布与分类 | 第8页 |
| 1.2.2 丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构与功能 | 第8-9页 |
| 1.3 昆虫丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第9-10页 |
| 1.4 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第10-12页 |
| 2 引言 | 第12-15页 |
| 2.1 研究的目的及意义 | 第12页 |
| 2.2 研究内容 | 第12-15页 |
| 2.2.1 BmSerpin-20 基因的原核表达 | 第12页 |
| 2.2.2 BmSerpin-20 基因在不同组织的表达分析 | 第12-13页 |
| 2.2.3 BmSerpin-20 基因在病原微生物处理后的表达分析 | 第13页 |
| 2.2.4 BmSerpin-20 蛋白处理家蚕后脂肪体中抗菌肽基因的表达分析 | 第13-14页 |
| 2.2.5 技术路线 | 第14-15页 |
| 3 材料与方法 | 第15-28页 |
| 3.1 实验材料 | 第15页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第15-19页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第15页 |
| 3.2.2 主要生化试剂 | 第15-16页 |
| 3.2.3 常用溶液的配制 | 第16-19页 |
| 3.3 实验方法 | 第19-28页 |
| 3.3.1 家蚕的饲养 | 第19页 |
| 3.3.2 家蚕组织的收集 | 第19页 |
| 3.3.3 家蚕总RNA的提取 | 第19页 |
| 3.3.4 提取的总RNA的质量检测 | 第19页 |
| 3.3.5 第一链cDNA的合成 | 第19-20页 |
| 3.3.6 PCR扩增 | 第20-22页 |
| 3.3.6.1 引物设计 | 第20-21页 |
| 3.3.6.2 PCR反应体系 | 第21页 |
| 3.3.6.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第21-22页 |
| 3.3.7 PCR产物的纯化(示意图) | 第22页 |
| 3.3.8 目的片段与pMD-19T的连接和转化 | 第22页 |
| 3.3.9 目的基因与pET-28a（+）基因质粒的抽提 | 第22-23页 |
| 3.3.10 原核表达载体构建 | 第23-24页 |
| 3.3.11 BmSerpin-20 重组蛋白诱导表达 | 第24页 |
| 3.3.12 SDS-PAGE电泳检测 | 第24页 |
| 3.3.13 Western blot检测 | 第24-25页 |
| 3.3.14 重组蛋白的纯化 | 第25页 |
| 3.3.15 多克隆抗体的制备与ELISA效价检测 | 第25-26页 |
| 3.3.16 组织蛋白提取 | 第26页 |
| 3.3.17 组织分布实验 | 第26-27页 |
| 3.3.18 不同微生物诱导家蚕幼虫BmSerpin-20 基因的表达研究 | 第27页 |
| 3.3.19 抗菌肽基因的表达研究 | 第27-28页 |
| 4 结果 | 第28-37页 |
| 4.1 家蚕脂肪体总RNA的提取 | 第28页 |
| 4.2 BmSerpin-20 基因克隆及重组表达载体的鉴定 | 第28-30页 |
| 4.3 重组BmSerpin-20 蛋白的诱导表达 | 第30-31页 |
| 4.4 重组BmSerpin-20 蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 4.5 ELISA效价检测 | 第32-33页 |
| 4.6 BmSerpin-20 基因的组织表达分析 | 第33页 |
| 4.7 不同微生物诱导家蚕幼虫脂肪体BmSerpin-20 基因的表达分析 | 第33-36页 |
| 4.8 抗菌肽基因的表达研究 | 第36-37页 |
| 5 讨论 | 第37-39页 |
| 5.1 表达载体的选择 | 第37页 |
| 5.2 重组蛋白的诱导表达 | 第37页 |
| 5.3 组织分布 | 第37-38页 |
| 5.4 免疫刺激反应 | 第38-39页 |
| 6 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 个人简介 | 第46页 |
| 读研期间发表的论文 | 第46页 |
