| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语表 | 第9-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-43页 |
| 1.1 固定化酶 | 第15-24页 |
| 1.1.1 固定化酶的分类 | 第15-20页 |
| 1.1.2 酶催化特异性定点共价固定化 | 第20-22页 |
| 1.1.3 合理设计改善固定化酶性质 | 第22-24页 |
| 1.2 酶的非特异性催化 | 第24-36页 |
| 1.2.1 α/β水解酶非特异性催化 | 第33-34页 |
| 1.2.2 水解酶催化 aldol 反应 | 第34-36页 |
| 1.3 荧光光谱分析小分子底物与酶作用 | 第36-39页 |
| 1.3.1 荧光光谱法 | 第36-37页 |
| 1.3.2 结合常数和结合位点数的确定 | 第37页 |
| 1.3.3 热力学分析和结合力类型的确定 | 第37-39页 |
| 1.4 本文的研究思想与主要内容 | 第39-43页 |
| 第二章 含有醛基标签载体的设计及构建 | 第43-59页 |
| 2.1 引言 | 第43页 |
| 2.2 材料与方法 | 第43-47页 |
| 2.2.1 主要仪器及试剂 | 第43-44页 |
| 2.2.2 溶剂配制 | 第44页 |
| 2.2.3 全质粒 PCR | 第44-45页 |
| 2.2.4 目的基因的 PCR | 第45页 |
| 2.2.5 片段回收、酶切及连接 | 第45-46页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第46-47页 |
| 2.2.7 单克隆菌株的筛选和鉴定 | 第47页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第47-57页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第47-49页 |
| 2.3.2 构建含有醛基标签载体 | 第49-53页 |
| 2.3.3 含有醛基标签重组模板蛋白表达载体构建 | 第53-57页 |
| 2.4 本章小结 | 第57-59页 |
| 第三章 含有醛基标签的模板酶表达 | 第59-69页 |
| 3.1 引言 | 第59页 |
| 3.2 材料和方法 | 第59-62页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第59页 |
| 3.2.2 蛋白的表达 | 第59-61页 |
| 3.2.3 蛋白浓度测定 | 第61页 |
| 3.2.4 酶活力测定 | 第61页 |
| 3.2.5 醛基标签验证 | 第61-62页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第62-67页 |
| 3.3.1 蛋白的表达及纯化 | 第62-66页 |
| 3.3.2 醛基标签的修饰 | 第66-67页 |
| 3.4 结论 | 第67-69页 |
| 第四章 含有醛基标签模板蛋白固定化 | 第69-77页 |
| 4.1 引言 | 第69页 |
| 4.2 材料与方法 | 第69-70页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第69页 |
| 4.2.2 载体修饰及活化 | 第69页 |
| 4.2.3 蛋白固定化 | 第69-70页 |
| 4.2.4 活力测定 | 第70页 |
| 4.2.5 固定化酶的活力回收和固定化率 | 第70页 |
| 4.2.6 固定化酶热稳定性及回收利用率 | 第70页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第70-74页 |
| 4.3.1 固定化验证 | 第70-73页 |
| 4.3.2 固定化酶活及回收率 | 第73页 |
| 4.3.3 固定化酶热稳定性 | 第73-74页 |
| 4.3.4 反复利用率 | 第74页 |
| 4.4 本章小结 | 第74-77页 |
| 第五章 ST0779 非特异性催化 aldol 反应 | 第77-85页 |
| 5.1 引言 | 第77页 |
| 5.2 材料和方法 | 第77-78页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第77页 |
| 5.2.2 酶催化 aldol 反应 | 第77-78页 |
| 5.2.3 产物分离及鉴定 | 第78页 |
| 5.2.4 动力学分析 | 第78页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第78-84页 |
| 5.3.1 产物的鉴定 | 第78-80页 |
| 5.3.2 不同酶催化反应 | 第80-82页 |
| 5.3.3 反应进程研究 | 第82-83页 |
| 5.3.4 酶动力学参数 | 第83-84页 |
| 5.4 本章小结 | 第84-85页 |
| 第六章 ST0779 催化 aldol 反应机制 | 第85-95页 |
| 6.1 引言 | 第85页 |
| 6.2 材料和方法 | 第85-86页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第85页 |
| 6.2.2 荧光光谱 | 第85页 |
| 6.2.3 蛋白结构模拟 | 第85-86页 |
| 6.3 实验结果 | 第86-94页 |
| 6.3.1 荧光光谱研究酶与底物作用 | 第86-87页 |
| 6.3.2 酶与底物结合位点数分析 | 第87-88页 |
| 6.3.3 酶与底物结合热力学参数 | 第88-89页 |
| 6.3.4 蛋白结构分析 | 第89-93页 |
| 6.3.5 酶非特异性催化 aldol 反应机制 | 第93-94页 |
| 6.4 本章小结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-109页 |
| 附录 I | 第109-115页 |
| 作者简介 | 第115-116页 |
| 攻读博士期间的主要成果 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117页 |