| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-18页 |
| ·研究概述 | 第10-12页 |
| ·酵母表达系统的研究进展 | 第10-12页 |
| ·酵母表达系统存在的问题 | 第12页 |
| ·影响酵母表达系统的因素 | 第12-16页 |
| ·分子伴侣对酵母酵母表达系统的影响 | 第13-15页 |
| ·信号肽对酵母表达系统的影响研究进展 | 第15-16页 |
| ·EXG1 的结构及生物活性特征 | 第16-18页 |
| 第二章 实验材料 | 第18-24页 |
| ·材料 | 第18-21页 |
| ·菌株 | 第18页 |
| ·质粒 | 第18页 |
| ·限制性内切酶及工具酶 | 第18页 |
| ·试剂盒 | 第18页 |
| ·核酸及蛋白分子量标准 | 第18页 |
| ·引物 | 第18-20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·试剂 | 第21-24页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要培养基 | 第21-22页 |
| ·主要溶液 | 第22-24页 |
| 第三章 实验步骤 | 第24-44页 |
| ·不同信号肽报告蛋白EXG1 基因的克隆 | 第24-27页 |
| ·自身信号肽EXG1 基因的克隆 | 第24页 |
| ·EXG1/αMF 基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·EXG1/αPre 基因的克隆 | 第25页 |
| ·EXG1/Bip 基因的克隆 | 第25-27页 |
| ·分子伴侣基因的克隆 | 第27-33页 |
| ·细胞质分子伴侣基因的克隆 | 第27-29页 |
| ·Ydj1 基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·Hsp104 基因的克隆 | 第28页 |
| ·Ssa1 基因的克隆 | 第28-29页 |
| ·内质网膜分子伴侣基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·Sec61α基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·Sec61β基因的克隆 | 第30页 |
| ·内质网腔分子伴侣基因的克隆 | 第30-32页 |
| ·Bip 基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·E101 基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·PDI 基因的克隆 | 第32页 |
| ·Hac1 基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·组成型启动子GAP 基因的克隆 | 第33页 |
| ·不同信号肽报告蛋白表达质粒的构建 | 第33-37页 |
| ·EXG1-pPIC9 的构建 | 第33-34页 |
| ·EXG1/αMF-pPIC9 的构建 | 第34-35页 |
| ·EXG1/αPre-pPIC9 的构建 | 第35-36页 |
| ·EXG1/Bip-pPIC9 的构建 | 第36-37页 |
| ·分子伴侣表达质粒的构建 | 第37-40页 |
| ·pBLArg-IX 质粒启动子置换 | 第37-38页 |
| ·单个分子伴侣表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·分子伴侣组合表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·表达载体转化酵母表达菌株及目的基因的诱导表达 | 第40-44页 |
| ·报告蛋白表达载体的线性化 | 第40页 |
| ·分子伴侣及其组合表达载体线性化 | 第40-41页 |
| ·巴斯德毕赤酵母GS115（GS200）感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·电击转化 | 第41-42页 |
| ·报告蛋白表达质粒电击转化GS115 | 第41-42页 |
| ·报告蛋白表达质粒电击转化GS200 | 第42页 |
| ·分子伴侣及其组合表达质粒电击转化报告蛋白-GS200 重组酵母细胞 | 第42页 |
| ·不同巴斯德毕赤酵母重组菌在摇瓶里的诱导表达 | 第42-44页 |
| ·不同信号肽报告蛋白在GS115 中的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·不同信号肽报告蛋白在GS200 中的诱导表达 | 第43-44页 |
| 第四章 实验结果 | 第44-52页 |
| ·目的基因的克隆 | 第44-45页 |
| ·报告蛋白基因的克隆 | 第44页 |
| ·分子伴侣基因的克隆 | 第44-45页 |
| ·不同信号肽报告蛋白表达载体的构建 | 第45页 |
| ·分子伴侣表达载体的构建 | 第45-47页 |
| ·表达不同信号肽EXG1 的GS115 阳性克隆筛选结果 | 第47页 |
| ·表达不同信号肽EXG1 的GS115 生长曲线 | 第47-48页 |
| ·在巴斯德毕赤酵母GS115 中的诱导表达 | 第48-49页 |
| ·分子伴侣对不同信号肽EXG1 在GS200 中的表达水平影响 | 第49-52页 |
| ·细胞质分子伴侣对不同信号肽EXG1 表达水平影响 | 第49页 |
| ·内质网膜分子伴侣对不同信号肽EXG1 表达水平的影响 | 第49-50页 |
| ·内质网腔分子伴侣对不同信号肽EXG1 表达水平的影响 | 第50-52页 |
| 第五章 讨论 | 第52-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 综述 | 第61-67页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 个人简历 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
