| 缩略词表 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-19页 |
| ·蛋白质的N~α-末端乙酰化修饰 | 第13-15页 |
| ·蛋白质N~α-末端乙酰化修饰及其生物学意义 | 第13页 |
| ·N~α-末端乙酰基转移酶 | 第13-14页 |
| ·蛋白质N~α-末端乙酰化修饰的一级结构要求 | 第14-15页 |
| ·胸腺素α1（Tα1） | 第15-16页 |
| ·Tα1 的发现 | 第15-16页 |
| ·Tα1 的生物学功能及其临床应用 | 第16页 |
| ·Tα1 的制备 | 第16页 |
| ·本课题的研究思路 | 第16-19页 |
| 第二章 敲除rims基因对ProTα乙酰化水平的影响 | 第19-31页 |
| ·实验材料 | 第19-22页 |
| ·菌株及质粒 | 第19页 |
| ·工具酶及分子量标准 | 第19-20页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·主要培养基及溶液 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-25页 |
| ·引物设计 | 第22-23页 |
| ·两端带有同源臂及FRT 位点的氯霉素抗性基因的扩增 | 第23-24页 |
| ·同源重组阳性克隆的获得 | 第24页 |
| ·重组大肠杆菌表达菌株的构建 | 第24-25页 |
| ·重组大肠杆菌表达菌株的培养 | 第25页 |
| ·ProTα的纯化 | 第25页 |
| ·用RP-HPLC 分析Q 柱纯化的ProTα | 第25页 |
| ·结果 | 第25-29页 |
| ·利用Red 重组技术成功敲除DH5α的rimJ、rimL 及rimI 基因 | 第25-28页 |
| ·ProTα在各缺陷菌株中的表达及不同程度乙酰化修饰 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-31页 |
| 第三章 过表达rims基因对ProTα乙酰化水平的影响 | 第31-43页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·菌株及质粒 | 第31页 |
| ·工具酶及分子量标准 | 第31页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·主要培养基及溶液 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-35页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第32-35页 |
| ·重组大肠杆菌表达菌株的构建 | 第35页 |
| ·重组大肠杆菌表达菌株的培养 | 第35页 |
| ·ProTα的纯化 | 第35页 |
| ·用RP-HPLC 分析Q 柱纯化的ProTα | 第35页 |
| ·统计分析方法 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-41页 |
| ·pOKBV 的构建 | 第35-36页 |
| ·pOKBV-rimJ、pOKBV-rimL 和pOKBV-rimI 重组表达质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·过表达rimJ 或rimL 基因使ProTα几乎完全乙酰化，过表达riml 基因抑制ProTα乙酰化 | 第37-39页 |
| ·过表达rimI 基因对ProTα乙酰化修饰影响的深入研究 | 第39-41页 |
| ·小结 | 第41-43页 |
| 第四章 N-末端氨基酸序列对ProTα乙酰化水平的影响 | 第43-61页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·菌株及质粒 | 第43-44页 |
| ·工具酶及分子量标准 | 第44页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·主要培养基及溶液 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-46页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·ProTα突变体表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·重组大肠杆菌表达菌株的培养 | 第46页 |
| ·ProTα的纯化 | 第46页 |
| ·ProTα突变体的乙酰化情况检测 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-60页 |
| ·N-末端第一位氨基酸对ProTα乙酰化的影响 | 第46-53页 |
| ·N-末端第二位氨基酸对ProTα乙酰化的影响 | 第53-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第五章讨论 | 第61-65页 |
| ·Red 重组效率的影响因素 | 第61页 |
| ·rims 基因对ProTαN-末端乙酰化修饰的影响 | 第61-62页 |
| ·N-末端氨基酸序列对ProTαN-末端乙酰化修饰的影响 | 第62-65页 |
| 第六章结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录 | 第71-77页 |
| 用Red重组技术敲除基因原理图 | 第71页 |
| rims 基因序列 | 第71-73页 |
| 用于分析“诱导时间”和“是否过表达rimI”的SAS程序及分析结果 | 第73-77页 |
| 文献综述：原核生物蛋白质翻译后修饰及其在生物药物中的应用 | 第77-90页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 个人简历 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
