| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 第一部分 人趋化因子CCL17和CCL22对CD4及CD8两种T淋巴细胞亚群的趋化能力比较研究 | 第15-28页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 1.1 材料 | 第16-17页 |
| 1.1.1 样本 | 第16页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第16页 |
| 1.1.3 仪器 | 第16-17页 |
| 1.2 实验方法 | 第17-19页 |
| 1.2.1 PBMC分离 | 第17页 |
| 1.2.2 流式细胞术分析PBMC细胞CCR4的表达 | 第17页 |
| 1.2.3 CD4和CD8 T淋巴细胞的流式分选 | 第17-18页 |
| 1.2.4 Transwell趋化实验 | 第18页 |
| 1.2.5 CCR4受体内化实验 | 第18-19页 |
| 1.3 结果 | 第19-25页 |
| 1.3.1 流式细胞仪分选获得的CD4及CD8细胞纯度检测 | 第19页 |
| 1.3.2 健康人外周血PBMC中CD4细胞与CD8细胞上CCR4表达水平检测 | 第19-20页 |
| 1.3.3 CCL17和CCL22对CD4及CD8细胞的趋化实验 | 第20-23页 |
| 1.3.4 CCL17和CCL22作用CD4及CD8细胞后CCR4受体内化结果分析 | 第23-25页 |
| 小结 | 第25-28页 |
| 第二部分CCL17和CCL22对CIK和DC-CIK的受体表达影响 | 第28-43页 |
| 引言 | 第28-29页 |
| 2.1 材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 样本 | 第29页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 方法 | 第30-34页 |
| 2.2.1 PBMC分离与CIK诱导培养 | 第30-31页 |
| 2.2.2 DC-CIK诱导培养 | 第31-32页 |
| 2.2.3 流式细胞术分析CIK及DC-CIK细胞CCR4的表达检测 | 第32页 |
| 2.2.4 流式鉴定CCR4的表达 | 第32页 |
| 2.2.5 Transwell趋化实验 | 第32-33页 |
| 2.2.6 ELISA检测CIK和DC-CIK细胞上清CCL17和CCL22的含量 | 第33页 |
| 2.2.7 加入一定浓度的CCL17和CCL22进行刺激CCR4的表达 | 第33-34页 |
| 2.3 结果 | 第34-41页 |
| 2.3.1 CIK细胞培养过程中CCR4的表达变化 | 第34-35页 |
| 2.3.2 DC-CIK细胞培养过程中CCR4的表达变化 | 第35-36页 |
| 2.3.3 CCL17和CCL22对DC-CIK的趋化作用比对CIK的趋化作用强 | 第36-37页 |
| 2.3.4 流式鉴定DC-CIK和CIK表达的CCR4 | 第37-39页 |
| 2.3.5 Elisa检测DC-CIK和CIK细胞上清中CCL17和CCL22两种趋化因子的含量 | 第39-40页 |
| 2.3.6 CIK培养过程中加入一定浓度的两种趋化因子可以提高CCR4的表达量 | 第40-41页 |
| 小结 | 第41-43页 |
| 第三部分 转染CCR4的CIK细胞的趋化功能以及对肿瘤的杀伤作用研究 | 第43-64页 |
| 引言 | 第43页 |
| 3.1 材料 | 第43-45页 |
| 3.1.1 质粒、菌株 | 第43-44页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第44-45页 |
| 3.2 方法 | 第45-56页 |
| 3.2.1 实验标本的收集 | 第45页 |
| 3.2.2 PBMC细胞的分离 | 第45-46页 |
| 3.2.3 上述分选细胞RNA的提取 | 第46页 |
| 3.2.4 目的基因片段的获得 | 第46-50页 |
| 3.2.5 线性化载体的获得 | 第50-52页 |
| 3.2.6 将目的基因片段和线性化载体进行连接反应 | 第52-53页 |
| 3.2.7 将连接后的质粒转化DH5α感受态细菌 | 第53页 |
| 3.2.8 将转化后的细菌菌落PCR并测序 | 第53-54页 |
| 3.2.9 质粒的提取 | 第54-55页 |
| 3.2.10 电转化 | 第55页 |
| 3.2.11 Transwell趋化实验 | 第55-56页 |
| 3.2.12 钙黄绿素(Calcein-AM)法检测转染CCR4的细胞的杀伤功能 | 第56页 |
| 3.3 结果 | 第56-63页 |
| 3.3.1 PCR获得的目的基因分别用BamHI和EcoRI双酶切后跑电泳经过胶纯化回收的结果 | 第56-57页 |
| 3.3.2 载体pcDNA3.1 和经过双酶切后的线性化载体结果 | 第57页 |
| 3.3.3 菌落PCR结果以及测序结果 | 第57-60页 |
| 3.3.4 转染结果 | 第60-61页 |
| 3.3.5 转染CCR4的CIK细胞的趋化作用强于未转染CCR4的CIK细胞 | 第61-62页 |
| 3.3.6 转染CCR4的CIK细胞比未转染CCR4的CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用更强 | 第62-63页 |
| 小结 | 第63-64页 |
| 讨论 | 第64-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附录一 英文缩略词表 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
