摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
缩略语表(Abbreviation) | 第9-11页 |
1 文献综述 | 第11-23页 |
1.1 探究动物摄食行为的重要性 | 第11页 |
1.2 中枢神经系统的结构和功能 | 第11-12页 |
1.3 中枢神经系统对动物摄食行为的调控 | 第12-13页 |
1.4 下丘脑在参与动物摄食调节中的作用 | 第13-15页 |
1.5 神经环路示踪的意义 | 第15-16页 |
1.6 神经环路示踪工具的开发与应用 | 第16-21页 |
1.6.1 狂犬病毒在神经示踪技术中的应用 | 第17-19页 |
1.6.2 腺相关病毒 | 第19页 |
1.6.3 EnvA/TVA system | 第19-21页 |
1.6.4 水泡性口炎病毒 | 第21页 |
1.7 CRISPR/Cas9技术 | 第21-23页 |
1.8 本课题的实验设计思路 | 第23页 |
2 目的与意义 | 第23-24页 |
3 材料与方法 | 第24-37页 |
3.1 实验材料 | 第24-26页 |
3.1.1 质粒、菌株、细胞系和实验动物 | 第24页 |
3.1.2 主要的药品、试剂和仪器 | 第24页 |
3.1.3 培养基及其配制 | 第24-25页 |
3.1.4 缓冲液(溶液)及其配制 | 第25-26页 |
3.2 实验方法 | 第26-37页 |
3.2.1 PCR扩增方法 | 第26页 |
3.2.2 DNA纯化分离的方法 | 第26-28页 |
3.2.2.1 DNA直接纯化分离的方法 | 第26-27页 |
3.2.2.2 DNA切胶回收的方法 | 第27页 |
3.2.2.3 质粒小提的方法 | 第27-28页 |
3.2.3 PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第28页 |
3.2.4 脂质体转染细胞的方法 | 第28-29页 |
3.2.5 潮霉素筛选稳定表达细胞系 | 第29页 |
3.2.6 酶切后连接以及同源重组的方法 | 第29-30页 |
3.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备 (氯化钙法) | 第30页 |
3.2.8 狂犬病毒的扩增 | 第30-31页 |
3.2.9 假狂犬病毒的包装(用EnvA细胞包装SADΔG-YFP病毒) | 第31-32页 |
3.2.10 狂犬病毒的浓缩 | 第32页 |
3.2.11 鼠脑的立体定位注射 | 第32-33页 |
3.2.12 腺相关病毒的包装 | 第33-34页 |
3.2.13 病毒滴度的测定(荧光斑计数法) | 第34-35页 |
3.2.14 间接免疫荧光法测定病毒毒价 | 第35页 |
3.2.15 小鼠心脏灌注 | 第35-36页 |
3.2.16 鼠脑切片 | 第36-37页 |
4 结果与分析 | 第37-51页 |
4.1. 摄食相关神经环路的示踪 | 第37-45页 |
4.1.1 SADΔG-YFP病毒的扩增 | 第37页 |
4.1.2 对下丘脑有轴突投射的神经元全脑内的示踪 | 第37-45页 |
4.1.3 小结 | 第45页 |
4.2 EnvA/TVA系统的应用 | 第45-48页 |
4.2.1 EnvA/TVA系统的构建 | 第45-47页 |
4.2.2 EnvA/TVA系统在鼠脑中的应用 | 第47-48页 |
4.3 B7B-VSV SAD G细胞系的构建 | 第48-50页 |
4.4 总结 | 第50-51页 |
讨论 | 第51-54页 |
参考文献 | 第54-59页 |
致谢 | 第59-60页 |
附录 | 第60页 |