| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1 前言 | 第12页 |
| 2 非特异性免疫系统概述 | 第12-14页 |
| 2.1 鱼类的非特异性免疫 | 第12-13页 |
| 2.2 非特异性免疫的模式识别受体 | 第13-14页 |
| 3 TOLL样受体研究进展 | 第14-20页 |
| 3.1 TOLL样受体的发现及种类 | 第14-15页 |
| 3.2 TOLL样受体的结构和分布 | 第15页 |
| 3.3 鱼类TOLL样受体的分类及免疫应答研究 | 第15-20页 |
| 3.3.1 TLR1亚家族 | 第16-17页 |
| 3.3.2 TLR3亚家族 | 第17页 |
| 3.3.3 TLR4亚家族 | 第17-18页 |
| 3.3.4 TLR5亚家族 | 第18页 |
| 3.3.5 TLR7亚家族 | 第18-19页 |
| 3.3.6 TLR11亚家族 | 第19-20页 |
| 4 鱼类TLR介导的免疫信号传导 | 第20-23页 |
| 4.1 TLR信号传导中的衔接蛋白 | 第20-21页 |
| 4.2 MyD88依赖途径 | 第21-22页 |
| 4.3 MyD88非依赖途径 | 第22-23页 |
| 5 黄颡鱼疾病研究概况 | 第23-24页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 黄颡鱼Pf_TLR18、Pf_TLR19和Pf_TLR21基因的克隆和序列分析 | 第25-47页 |
| 1 前言 | 第25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-34页 |
| 2.1 实验样本 | 第25页 |
| 2.2 主要实验仪器与设备 | 第25-26页 |
| 2.3 药品与试剂 | 第26-27页 |
| 2.3.1 试剂盒及药品 | 第26页 |
| 2.3.2 主要试剂配置 | 第26-27页 |
| 2.4 引物设计 | 第27-28页 |
| 2.5 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.5.1 总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.5.2 总RNA质量检测 | 第29页 |
| 2.5.3 cDNA模板制备 | 第29-30页 |
| 2.5.4 黄颡鱼Pf_TLR18、Pf_TLR19和Pf_TLR21 cDNA中间保守区片段的克隆 | 第30-31页 |
| 2.5.5 PCR产物的分离，回收和纯化 | 第31页 |
| 2.5.6 感受态细胞制备 | 第31-32页 |
| 2.5.7 连接和转化 | 第32-33页 |
| 2.5.8 菌液PCR检测 | 第33页 |
| 2.5.9 黄颡鱼Pf_TLR18, Pf_TLR19和Pf_TLR21 cDNA 3'端扩增 | 第33页 |
| 2.5.10 黄颡鱼Pf_TLR21 cDNA 5'端扩增 | 第33-34页 |
| 2.5.11 序列的生物信息学分析 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-45页 |
| 3.1 总RNA的检测 | 第34-35页 |
| 3.2 黄颡鱼Pf_TLR18 cDNA部分序列的克隆与分析 | 第35-39页 |
| 3.2.1 黄颡鱼Pf_TLR18 cDNA部分序列的特征 | 第35-37页 |
| 3.2.2 黄颡鱼Pf_TLR18氨基酸序列分析 | 第37-38页 |
| 3.2.3 黄颡鱼Pf_TLR18基因的系统发育 | 第38-39页 |
| 3.3 黄颡鱼Pf_TLR19 cDNA部分序列的克隆与分析 | 第39-42页 |
| 3.3.1 黄颡鱼Pf_TLR19 cDNA部分序列的特征 | 第39-42页 |
| 3.3.2 黄颡鱼Pf_TLR19氨基酸序列同源性分析 | 第42页 |
| 3.3.3 黄颡鱼Pf_TLR19基因的系统发育 | 第42页 |
| 3.4 黄颡鱼Pf_TLR21 cDNA序列的克隆与分析 | 第42-45页 |
| 3.4.1 黄颡鱼Pf_TLR21 cDNA部分序列的特征 | 第42-45页 |
| 3.4.2 黄颡鱼Pf_TLR21氨基酸序列同源性分析 | 第45页 |
| 3.4.3 黄颡鱼Pf_TLR21基因的系统发育 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 黄颡鱼Pf_TLR18、Pf_TLR19和Pf_TLR21基因mRNA的表达分析 | 第47-69页 |
| 1 前言 | 第47页 |
| 2 材料和方法 | 第47-52页 |
| 2.1 实验内容和实验样本 | 第47-49页 |
| 2.1.1 黄颡鱼成鱼组织样本采集 | 第47页 |
| 2.1.2 黄颡鱼早期发育阶段样本采集 | 第47-48页 |
| 2.1.3 灭活嗜水气单胞菌刺激后组织样本的采集 | 第48-49页 |
| 2.1.4 不同配体刺激淋巴细胞后样品的采集 | 第49页 |
| 2.2 主要实验仪器与设备 | 第49-50页 |
| 2.3 药品与试剂 | 第50页 |
| 2.4 引物设计 | 第50-51页 |
| 2.5 实验方法 | 第51-52页 |
| 2.5.1 总RNA的提取 | 第51页 |
| 2.5.2 cDNA模板制备 | 第51页 |
| 2.5.3 荧光定量PCR引物检测 | 第51-52页 |
| 2.5.4 数据分析 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-64页 |
| 3.1 黄颡鱼Pf_TLR18、Pf_TLR19和Pf_TLR21基因mRN A在成鱼组织中的表达 | 第52-54页 |
| 3.1.1 黄颡鱼Pf_TLR18基因mRNA的组织表达 | 第52-54页 |
| 3.1.2 黄颡鱼Pf_TLR19基因mRNA的组织表达 | 第54页 |
| 3.1.3 黄颡鱼Pf_TLR21基因mRNA的组织表达 | 第54页 |
| 3.2 黄颡鱼Pf_TLR18、Pf_TLR19和Pf_TLR21 mRNA在胚胎和早期发育阶段的表达 | 第54-57页 |
| 3.2.1 黄颡鱼Pf_TLR18基因mRNA在胚胎和早期发育阶段的表达 | 第54-56页 |
| 3.2.2 黄颡鱼Pf_TLR19基因mRN A在胚胎和早期发育阶段的表达 | 第56页 |
| 3.2.3 黄颡鱼Pf_TLR21基因mRNA在胚胎和早期发育阶段的表达 | 第56-57页 |
| 3.3 灭活嗜水气单胞菌刺激前后黄颡鱼Pf_TLR18、Pf_TLR19和Pf_TLR21 mRN A在5个组织中表达量的变化 | 第57-62页 |
| 3.3.1 Pf_TLR18 mRN A表达量的变化 | 第57-59页 |
| 3.3.2 Pf_TLR19基因mRNA表达量的变化 | 第59-60页 |
| 3.3.3 Pf_TLR21基因mRNA表达量的变化 | 第60-62页 |
| 3.4 LPS、PGN和Poly (I:C)刺激后黄颡鱼Pf_TLR18、Pf_TLR19和Pf_TLR21 mRN A在黄颡鱼外周血淋巴细胞中表达量的变化 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-69页 |
| 4.1 黄颡鱼Pf_TLR18、Pf_TLR19和Pf_TLR21基因mRN A的组织特异性表达 | 第64-65页 |
| 4.2 黄颡鱼Pf_TLR18、Pf_TLR19和Pf_TLR21基因mRN A在胚胎和早期发育阶段的表达特征 | 第65-66页 |
| 4.3 灭活细菌刺激后黄颡鱼Pf_TLR18、Pf_TLR19和Pf_TLR21基因mRNA在5个组织中表达量的变化 | 第66-69页 |
| 第四章 黄颡鱼LRR18、LRR19和LRR21的原核表达 | 第69-79页 |
| 1 前言 | 第69页 |
| 2 材料和方法 | 第69-75页 |
| 2.1 主要实验仪器与设备 | 第69页 |
| 2.2 药品与试剂 | 第69-70页 |
| 2.2.1 试剂盒及药品 | 第69页 |
| 2.2.2 主要试剂配置 | 第69-70页 |
| 2.3 引物设计 | 第70-71页 |
| 2.4 实验方法 | 第71-75页 |
| 2.4.1 胞外区片段的克隆 | 第71页 |
| 2.4.2 质粒的提取与检测 | 第71-72页 |
| 2.4.3 PCR产物与pGEX-4T-1 载体的连接和转化 | 第72-73页 |
| 2.4.4 重组质粒的诱导表达表达 | 第73-74页 |
| 2.4.5 SDS-PAGE电泳 | 第74-75页 |
| 2.4.6 表达产物的鉴定 | 第75页 |
| 3 结果与分析 | 第75-78页 |
| 3.1 构建黄颡鱼胞外区重组质粒 | 第75-76页 |
| 3.2 黄颡鱼外区片段LRR18、LRR19和LRR21的诱导表达 | 第76-78页 |
| 4 讨论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
