| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1.1 鳜鱼主要疫病及其疫苗研究概况 | 第14-16页 |
| 1.1.1 鳜传染性脾肾坏死病毒病 | 第14-15页 |
| 1.1.2 鳜疫苗研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 灭活疫苗灭活检验技术研究概况 | 第16-19页 |
| 1.2.1 灭活方法 | 第16-17页 |
| 1.2.2 灭活检验技术 | 第17-19页 |
| 1.3 灭活疫苗有效抗原含量测定 | 第19-21页 |
| 1.3.1 ELISA技术 | 第20页 |
| 1.3.2 其他技术 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 基于荧光定量RT-PCR监测病毒mRNA的灭活快速检测方法研究 | 第22-35页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-27页 |
| 2.1.1 细胞系与病毒株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第22页 |
| 2.1.4 引物设计与合成 | 第22-23页 |
| 2.1.5 靶标基因筛选 | 第23-24页 |
| 2.1.6 基于荧光定量PCR检测重组质粒拷贝数方法 | 第24-25页 |
| 2.1.7 基于病毒mRNA荧光定量PCR检测方法 | 第25-27页 |
| 2.1.8 方法验证与应用 | 第27页 |
| 2.2 结果 | 第27-32页 |
| 2.2.1 目标基因的筛选 | 第27-28页 |
| 2.2.2 重组质粒拷贝数检测方法的建立 | 第28-30页 |
| 2.2.3 荧光定量PCR检测病毒mRNA实验 | 第30-31页 |
| 2.2.4 方法验证与应用 | 第31-32页 |
| 2.3 讨论 | 第32-35页 |
| 第三章 基于跨内含子设计引物检测病毒mRNA的灭活快速巢氏PCR检测方法研究 | 第35-49页 |
| 3.1 材料与方法 | 第35-40页 |
| 3.1.1 细胞系与病毒株 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第35页 |
| 3.1.4 内含子验证 | 第35-36页 |
| 3.1.5 DNA阳性模板的制备 | 第36页 |
| 3.1.6 RNA提取、cDNA模板的制备及PCR扩增 | 第36-38页 |
| 3.1.7 巢氏PCR扩增反应 | 第38-40页 |
| 3.1.8 检测方法验证与应用 | 第40页 |
| 3.2 结果 | 第40-46页 |
| 3.2.1 内含子验证 | 第40-41页 |
| 3.2.2 检测IN-3 内含子巢氏PCR方法的建立 | 第41-44页 |
| 3.2.3 检测IN-3 内含子巢氏PCR方法灵敏度 | 第44-45页 |
| 3.2.4 方法验证和应用 | 第45-46页 |
| 3.3 讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 鳜传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗有效抗原含量测定技术研究 | 第49-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第49-55页 |
| 4.1.1 动物和细胞系 | 第49页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 4.1.3 主要实验仪器 | 第49-50页 |
| 4.1.4 ISKNV的增殖与纯化 | 第50页 |
| 4.1.5 纯化病毒的电镜观察和SDS-PAGE检测 | 第50-51页 |
| 4.1.6 重组蛋白表达与纯化 | 第51-52页 |
| 4.1.7 动物免疫 | 第52页 |
| 4.1.8 细胞融合 | 第52-53页 |
| 4.1.9 杂交瘤细胞株筛选 | 第53-54页 |
| 4.1.10 单克隆抗体免疫球蛋白类-亚类-型鉴定和抗原表位分析 | 第54页 |
| 4.1.11 抗体纯化 | 第54页 |
| 4.1.12 双抗体夹心ELISA法的建立 | 第54-55页 |
| 4.1.13 方法验证 | 第55页 |
| 4.2 结果 | 第55-60页 |
| 4.2.1 ISKNV的纯化检测 | 第55-56页 |
| 4.2.2 重组MCP的SDS-PAGE检测 | 第56-57页 |
| 4.2.3 ELISA检测免疫效价 | 第57页 |
| 4.2.4 杂交瘤细胞株的鉴定 | 第57-58页 |
| 4.2.5 单克隆抗体免疫球蛋白类-亚类-型鉴定和抗原表位分析 | 第58页 |
| 4.2.6 单克隆抗体的鉴定 | 第58-59页 |
| 4.2.7 双抗体夹心ELISA法的建立 | 第59-60页 |
| 4.2.8 方法的验证与应用 | 第60页 |
| 4.3 讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 传染性脾肾坏死病毒灭活条件的优化及抗原保存期研究 | 第62-67页 |
| 5.1 材料与方法 | 第62-63页 |
| 5.1.1 细胞系与病毒株 | 第62页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 5.1.3 主要实验仪器 | 第62页 |
| 5.1.4 病毒的增殖 | 第62页 |
| 5.1.5 病毒灭活 | 第62-63页 |
| 5.1.6 灭活验证及抗原检测 | 第63页 |
| 5.1.7 抗原保存期测定 | 第63页 |
| 5.2 结果 | 第63-65页 |
| 5.2.1 病毒滴度测定结果 | 第63页 |
| 5.2.2 病毒灭活方法的比较 | 第63-65页 |
| 5.3 讨论 | 第65-67页 |
| 全文总结 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-71页 |
| 参考文献 | 第71-82页 |
| 硕士期间科研成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
