| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 橡胶树抗寒特性 | 第10页 |
| 1.2 植物抗寒生理生化研究 | 第10-12页 |
| 1.2.1 生物膜系统与寒害 | 第10页 |
| 1.2.2 植物抗寒理化指标 | 第10-12页 |
| 1.2.2.1 电导率 | 第11页 |
| 1.2.2.2 脯氨酸 | 第11页 |
| 1.2.2.3 丙二醛(MDA) | 第11-12页 |
| 1.3 抗寒相关基因 | 第12-14页 |
| 1.3.1 ICE1 | 第12-14页 |
| 1.3.2 CBF | 第14页 |
| 1.3.3 COR | 第14页 |
| 1.4 植物抗逆相关的AP2/ERF转录因子 | 第14-17页 |
| 1.4.1 AP2/ERF转录因子特点 | 第15-16页 |
| 1.4.2 AP2/ERF转录因子家族中的ERF亚族转录因子 | 第16-17页 |
| 1.5 植物其他抗逆相关转录因子 | 第17-19页 |
| 1.5.1 WRKY转录因子 | 第17-18页 |
| 1.5.2 MYB转录因子 | 第18页 |
| 1.5.3 bZIP转录因子 | 第18-19页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 1.7 本研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 引物 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-38页 |
| 2.2.1 橡胶树植株的低温处理 | 第22-23页 |
| 2.2.2 橡胶树总RNA的提取与质量检测 | 第23-24页 |
| 2.2.3 单链cDNA的合成 | 第24-25页 |
| 2.2.4 橡胶树HbERF1基因的获得 | 第25-31页 |
| 2.2.4.1 经典RACE法扩增HbERF1基因5’端序列 | 第25-26页 |
| 2.2.4.2 经典RACE法扩增HbERF1基因3’端序列 | 第26-28页 |
| 2.2.4.3 切胶回收RACE目的片段 | 第28页 |
| 2.2.4.4 RACE目的片段克隆T-载体,转化大肠杆菌送测序 | 第28-29页 |
| 2.2.4.5 HbERF1基因的PCR扩增及其质粒提取 | 第29-31页 |
| 2.2.5 HbERF1转化拟南芥表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.6 农杆菌介导HbERF1基因的转化和筛选 | 第32-33页 |
| 2.2.6.1 HbERF1基因电击转化农杆菌GV3101菌株 | 第32页 |
| 2.2.6.2 喷雾法转化拟南芥植株 | 第32-33页 |
| 2.2.6.3 拟南芥转化植株的筛选 | 第33页 |
| 2.2.7 转基因拟南芥植株的PCR检测与Southern杂交 | 第33-36页 |
| 2.2.7.1 拟南芥植株DNA的提取 | 第33页 |
| 2.2.7.2 转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.2.7.3 基因组DNA的酶切 | 第33-34页 |
| 2.2.7.4 琼脂糖凝胶电泳与洗胶平衡 | 第34页 |
| 2.2.7.5 DNA的印迹转移 | 第34-36页 |
| 2.2.8 不同胁迫处理转HbERF1基因拟南芥纯系植株 | 第36-37页 |
| 2.2.8.1 低温处理 | 第36-37页 |
| 2.2.8.2 PEG模拟干旱处理 | 第37页 |
| 2.2.8.3 NaCl处理 | 第37页 |
| 2.2.8.4 PEG模拟干旱处理和NaCl处理表型观察 | 第37页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR | 第37-38页 |
| 2.2.9.1 荧光定量PCR的引物设计 | 第37页 |
| 2.2.9.2 荧光定量PCR的反应体系和反应程序 | 第37-38页 |
| 2.2.9.3 荧光定量PCR结果分析 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-62页 |
| 3.1 橡胶树HbERF1基因的克隆 | 第38-40页 |
| 3.1.1 橡胶树总RNA的提取与质量检测 | 第38-39页 |
| 3.1.2 橡胶树HbERF1基因全长cDNA的获得 | 第39-40页 |
| 3.2 橡胶树HbERF1基因的生物信息学分析 | 第40-49页 |
| 3.2.1 HbERF1基因序列及其ORF预测 | 第40-41页 |
| 3.2.2 HbERF1蛋白质一级结构分析 | 第41-42页 |
| 3.2.3 HbERF1蛋白质亚细胞定位、结构域分析及其功能预测 | 第42-43页 |
| 3.2.4 HbERF1蛋白质的信号肽、疏水性及跨膜区预测 | 第43-45页 |
| 3.2.5 HbERF1基因编码氨基酸的二级结构预测 | 第45-47页 |
| 3.2.6 HbERF1蛋白的三级结构预测 | 第47-48页 |
| 3.2.7 HbERF1同源性分析 | 第48-49页 |
| 3.3 橡胶树HbERF1基因的表达特性分析 | 第49-51页 |
| 3.3.1 HbERF1基因在不同组织中的表达分析 | 第49页 |
| 3.3.2 HbERF1基因在橡胶树不同品系不同组织的表达分析 | 第49-51页 |
| 3.4 HbERF1基因在转基因拟南芥中的表达分析 | 第51-59页 |
| 3.4.1 转基因拟南芥PCR检测结果 | 第51-52页 |
| 3.4.2 转基因拟南芥纯系植株的Southern鉴定 | 第52-53页 |
| 3.4.3 野生型和转基因拟南芥响应低温诱导表达分析 | 第53-56页 |
| 3.4.3.1 HbERF1基因转拟南芥S1株系在4℃低温处理下的表达 | 第54-55页 |
| 3.4.3.2 HbERF1基因转拟南芥S3株系在4℃低温处理下的表达 | 第55页 |
| 3.4.3.3 拟南芥低温相关基因COR15a在低温处理下的表达 | 第55-56页 |
| 3.4.4 拟南芥乙烯相关基因ETR1和乙烯应答基因ERS1在低温处理下的表达 | 第56-58页 |
| 3.4.5 PEG模拟干旱胁迫下拟南芥脱水应答相关基因AtRD22和AtRD29A的表达 | 第58页 |
| 3.4.6 NaCl高盐胁迫下拟南芥脱水应答相关基因AtRD22和AtRD29A的表达 | 第58-59页 |
| 3.5 PEG模拟干旱胁迫拟南芥的表型观察 | 第59-60页 |
| 3.6 NaCl高盐胁迫拟南芥的表型观察 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| 4.1 HbERF1生物信息学的探讨 | 第62-63页 |
| 4.2 HbERF1在乙烯应答信号通路中作用的探讨 | 第63-64页 |
| 4.3 关于RD22和RD29A表达模式的探讨 | 第64-65页 |
| 4.4 HbERF1基因在橡胶树抗寒育种中的应用 | 第65-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
