中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
缩略语/符号说明 | 第11-12页 |
前言 | 第12-15页 |
研究现状、成果 | 第12-14页 |
研究目的、方法 | 第14-15页 |
一、缺血再灌注对小鼠肝脏miR-30b表达及自噬水平的影响 | 第15-35页 |
1.1 对象和方法 | 第15-27页 |
1.1.1 实验动物 | 第15页 |
1.1.2 主要实验试剂 | 第15-16页 |
1.1.3 主要仪器设备 | 第16页 |
1.1.4 试剂配制 | 第16-18页 |
1.1.5 小鼠肝脏缺血再灌注模型建立 | 第18-19页 |
1.1.6 血生化指标检测 | 第19页 |
1.1.7 肝组织病理学检测 | 第19-20页 |
1.1.8 透射电镜检测 | 第20页 |
1.1.9 TUNEL检测凋亡 | 第20-21页 |
1.1.10 qRT-PCR检测 | 第21-24页 |
1.1.11 蛋白印迹技术检测(Western blot) | 第24-27页 |
1.1.12 统计学处理 | 第27页 |
1.2 结果 | 第27-32页 |
1.2.1 各组小鼠血清转氨酶的变化 | 第27-28页 |
1.2.2 小鼠肝脏病理学表现 | 第28页 |
1.2.3 各组小鼠肝组织miR-30b-5p、Atg12 mRNA、Atg5 mRNA的表达变化 | 第28-29页 |
1.2.4 TUNEL检测肝细胞凋亡结果 | 第29-30页 |
1.2.5 透射电镜观察各组肝组织内自噬体的变化 | 第30-31页 |
1.2.6 Western blot结果 | 第31-32页 |
1.3 讨论 | 第32-34页 |
1.4 小结 | 第34-35页 |
二、miR-30b对小鼠肝缺血再灌注损伤的影响 | 第35-45页 |
2.1 对象和方法 | 第35-39页 |
2.1.1 实验动物 | 第35页 |
2.1.2 主要实验试剂 | 第35页 |
2.1.3 主要仪器设备 | 第35-36页 |
2.1.4 试剂配制 | 第36-38页 |
2.1.5 小鼠肝脏缺血再灌注模型建立 | 第38页 |
2.1.6 血生化指标检测 | 第38页 |
2.1.7 肝组织病理学检测 | 第38页 |
2.1.8 免疫组织化学技术检测 | 第38页 |
2.1.9 TUNEL检测凋亡 | 第38-39页 |
2.1.10 蛋白印迹技术检测(Western blot) | 第39页 |
2.1.11 统计学处理 | 第39页 |
2.2 结果 | 第39-43页 |
2.2.1 各组小鼠血清转氨酶的变化 | 第39-40页 |
2.2.2 小鼠肝脏病理学表现 | 第40页 |
2.2.3 TUNEL检测肝细胞凋亡结果 | 第40-41页 |
2.2.4 免疫组化检测各组肝脏PCNA、Caspase-3 表达与分布 | 第41-42页 |
2.2.5 Western blot检测各组肝组织相关凋亡蛋白的表达 | 第42-43页 |
2.3 讨论 | 第43-44页 |
2.4 小结 | 第44-45页 |
三、miR-30b调控Atg12对小鼠肝细胞缺氧/复氧诱导自噬的作用 | 第45-66页 |
3.1 对象和方法 | 第45-56页 |
3.1.1 细胞系 | 第45页 |
3.1.2 主要实验试剂 | 第45-46页 |
3.1.3 主要仪器设备 | 第46页 |
3.1.4 试剂配制 | 第46-48页 |
3.1.5 AML12细胞复苏、传代、培养与冻存 | 第48-49页 |
3.1.6 双荧光素酶载体构建 | 第49-52页 |
3.1.7 miRNA靶基因荧光酶素报告验证 | 第52-53页 |
3.1.8 肝细胞系分组及处理 | 第53-54页 |
3.1.9 MTT检测细胞存活率 | 第54页 |
3.1.10 激光扫描共聚焦显微镜检测 | 第54-55页 |
3.1.11 透射电镜检测肝细胞内自噬体 | 第55页 |
3.1.12 qRT-PCR检测 | 第55页 |
3.1.13 蛋白印迹技术检测(Western blot) | 第55-56页 |
3.1.14 统计学处理 | 第56页 |
3.2 结果 | 第56-62页 |
3.2.1 miR-30b靶基因的预测及双荧光素酶报告基因检测、分析 | 第56页 |
3.2.2 共聚焦显微镜观察各组肝细胞内LC3荧光斑点的数量与分布 | 第56-57页 |
3.2.3 透射电镜观察各组肝细胞内自噬体的数量与分布 | 第57-58页 |
3.2.4 自噬对缺氧/复氧诱导AML12细胞存活率的影响 | 第58-59页 |
3.2.5 miR-30b对缺氧/复氧诱导AML12细胞存活率的影响 | 第59页 |
3.2.6 验证Atg12 siRNA的干扰效果 | 第59-60页 |
3.2.7 敲低Atg12对缺氧/复氧诱导AML12细胞存活率的影响 | 第60-61页 |
3.2.8 miR-30b调节Atg12对缺氧/复氧诱导AML12细胞自噬的影响 | 第61-62页 |
3.3 讨论 | 第62-64页 |
3.4 小结 | 第64-66页 |
结论 | 第66-67页 |
参考文献 | 第67-73页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第73-76页 |
附录 | 第76-77页 |
综述 miRNA与自噬研究进展 | 第77-95页 |
综述参考文献 | 第86-95页 |
致谢 | 第95-96页 |
个人简历 | 第96页 |