| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1. 鱼类精子冷冻保存研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1 鱼类精子的主要生理特性 | 第13页 |
| 1.2 鱼类精子冷冻保存的基本原理 | 第13-14页 |
| 1.3 鱼类精子冷冻保存的主要成就及存在问题 | 第14-16页 |
| 1.4 鱼类精子冷冻保存在水产中的应用 | 第16页 |
| 2. 鱼类胚胎冷冻保存研究进展 | 第16-21页 |
| 2.1 鱼类胚胎冷冻的影响因子 | 第17-20页 |
| 2.2 鱼类胚胎冷冻保存的现状 | 第20-21页 |
| 3. 内参基因的筛选概述及CIRP、SOX9、HSP70基因研究进展 | 第21-23页 |
| 3.1 内参基因概述及筛选程序方法 | 第21页 |
| 3.2 鱼类内参基因筛选的必要性 | 第21页 |
| 3.3 CIRP、SOX9、HSP70基因研究进展 | 第21-23页 |
| 第二章 钝吻黄盖鲽(Pseudopleuronectes yokohamae)精子冷冻保存及生理特性分析 | 第23-33页 |
| 1. 材料与方法 | 第23-26页 |
| 1.1 采集亲鱼精液 | 第23页 |
| 1.2 精子稀释液的配制 | 第23-24页 |
| 1.3 精子稀释液的筛选 | 第24-25页 |
| 1.4 精子抗冻剂的筛选 | 第25页 |
| 1.5 激活精子海水盐度的筛选 | 第25页 |
| 1.6 冷冻精子授精实验 | 第25页 |
| 1.7 利用计算机辅助精子分析系统（CASA）分析冷冻精子的运动参数 | 第25页 |
| 1.8 数据处理 | 第25-26页 |
| 2. 结果 | 第26-30页 |
| 2.1 稀释液的筛选 | 第26-27页 |
| 2.2 抗冻剂的筛选 | 第27-28页 |
| 2.3 盐度对钝吻黄盖鲽冷冻精子活力的影响 | 第28页 |
| 2.4 冷冻精子授精 | 第28-30页 |
| 2.5 解冻精子的运动参数 | 第30页 |
| 3. 讨论 | 第30-33页 |
| 第三章 青鳉(Oryzias melastigma)胚胎的冷冻保存 | 第33-42页 |
| 1. 材料与方法 | 第33-35页 |
| 1.1 实验材料及胚胎观察 | 第33-34页 |
| 1.2 实验所需试剂及不同玻璃化液的配制 | 第34页 |
| 1.3 胚胎发育时期的筛选 | 第34页 |
| 1.4 三种渗透性抗冻剂比例的筛选 | 第34-35页 |
| 1.5 非渗透性抗冻剂的筛选 | 第35页 |
| 1.6 利用玻璃化液PMG2G4对胚胎进行冷超低温冻保存 | 第35页 |
| 2. 结果 | 第35-40页 |
| 2.1 胚胎发育不同时期的观察情况 | 第35-36页 |
| 2.2 发育的不同时期胚胎的适应性比较 | 第36-38页 |
| 2.3 三种抗冻剂的不同比例对胚胎毒性的影响 | 第38页 |
| 2.4 四种糖类对胚胎毒性的影响 | 第38页 |
| 2.5 不同浓度葡萄糖对胚胎毒性的影响 | 第38-39页 |
| 2.6 利用PMG2G4对胚胎进行冷冻保存 | 第39-40页 |
| 3. 讨论 | 第40-42页 |
| 3.1 关于冷冻的最适胚胎时期 | 第40页 |
| 3.2 关于渗透性抗冻剂和非渗透性抗冻剂 | 第40-42页 |
| 第四章 低温状态下牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎内参基因的筛选及CIRP、SOX9和HSP70基因的表达 | 第42-54页 |
| 1. 实验材料及主要试剂 | 第42-43页 |
| 1.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 1.2 实验主要试剂 | 第43页 |
| 2. 实验方法 | 第43-48页 |
| 2.1 总RNA的提取及c DNA的合成 | 第43-44页 |
| 2.2 内参基因的分析 | 第44-46页 |
| 2.3 CIRP、SOX9和HSP70在低温处理尾芽期胚胎中的表达 | 第46-48页 |
| 3. 实验结果 | 第48-52页 |
| 3.1 RNA的提取情况 | 第48页 |
| 3.2 内参基因普通PCR产物检测 | 第48-49页 |
| 3.3 低温状态下牙鲆胚胎内参基因稳定性研究 | 第49-50页 |
| 3.4 CIRP、SOX9和HSP70在低温处理尾芽期胚胎中的表达结果 | 第50-52页 |
| 4. 讨论 | 第52-54页 |
| 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-67页 |
| 论文资助课题名称和项目编号 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 发表论文 | 第69页 |
