| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-29页 |
| ·丁二酮概况 | 第12-14页 |
| ·丁二酮理化性质 | 第12页 |
| ·丁二酮的应用 | 第12页 |
| ·丁二酮的生产现状 | 第12-14页 |
| ·微生物发酵法生产丁二酮的研究进展 | 第14-22页 |
| ·微生物发酵法生产丁二酮的菌种 | 第14-15页 |
| ·微生物发酵法生产丁二酮的底物 | 第15-16页 |
| ·微生物发酵法生产丁二酮的代谢途径 | 第16-18页 |
| ·丁二酮合成关键酶以及基因的研究 | 第18-19页 |
| ·发酵液中产物的检测 | 第19-22页 |
| ·微生物发酵法生产丁二酮存在的问题 | 第22页 |
| ·通过基因敲除技术构建合成丁二酮的工程菌 | 第22-27页 |
| ·概述 | 第22-23页 |
| ·基因敲除技术的原理及方法 | 第23-25页 |
| ·基因敲除技术的应用及前景 | 第25-26页 |
| ·基因敲除技术的缺陷 | 第26-27页 |
| ·过量表达关键酶基因工程菌的构建 | 第27页 |
| ·本论文的立题依据和研究内容 | 第27-29页 |
| 2 2,3-丁二醇氧化还原酶基因敲除重组菌的构建及鉴定 | 第29-57页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·实验材料和仪器 | 第29-33页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·引物 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·仪器 | 第31-32页 |
| ·常用培养基 | 第32页 |
| ·常用溶液的配制 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-44页 |
| ·Klebsiella pneumoniae CICC10011耐药性分析 | 第33页 |
| ·Klebsiella pneumoniae CICC10011基因组DNA的提取 | 第33页 |
| ·bud C基因片段的克隆 | 第33-35页 |
| ·待融合片段的独立扩增 | 第35-38页 |
| ·融合片段的全长扩增及鉴定 | 第38-40页 |
| ·电转化 | 第40-41页 |
| ·重组菌的验证 | 第41-44页 |
| ·实验结果与讨论 | 第44-56页 |
| ·基因敲除标记的选取 | 第44页 |
| ·budC基因片段的克隆 | 第44-48页 |
| ·同源重组线性DNA片段的获得 | 第48-50页 |
| ·重组菌的验证 | 第50-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 3 过量表达α-乙酰乳酸合成酶基因菌株的构建和鉴定 | 第57-69页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·实验材料和仪器 | 第57-58页 |
| ·菌株和质粒 | 第57页 |
| ·引物 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57-58页 |
| ·仪器 | 第58页 |
| ·常用培养基 | 第58页 |
| ·常用溶液的配制 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-60页 |
| ·重组菌株的构建 | 第58-59页 |
| ·菌体浓度测定 | 第59页 |
| ·底物葡萄糖及代谢产物浓度测定 | 第59-60页 |
| ·α-乙酰乳酸合成酶酶活测定 | 第60页 |
| ·实验结果与讨论 | 第60-68页 |
| ·als基因鉴定 | 第60-61页 |
| ·重组质粒pBR322-als的构建及酶切鉴定 | 第61-62页 |
| ·重组菌株K.pneumoniae CICC10011-1的构建和初步鉴定 | 第62-63页 |
| ·α-乙酰乳酸合成酶活分析 | 第63-64页 |
| ·重组菌株K.pneumoniae CICC10011-1生长代谢特性研究 | 第64-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 附录A 设计合成基因敲除片段的引物 | 第74-75页 |
| 附录B 标准物校正因子计算 | 第75-76页 |
| 附录C als基因核苷酸序列图谱 | 第76-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
